二、实验材料和实验方法

一．实验材料：

本实验研究材料是利用甲基磺酸乙酯（EMS）处理籼稻品种蜀恢的种子，诱变后获得后代中发现了一个早衰突变体，F2经过多代自交，发现其后代水稻植株性状稳定遗传，将其株系命名为FG35。

1.2　定位群体构建

将早衰突变体与粳稻品种日本晴（Nipponbare）杂交，构建F2分离群体，大田播种，在F2群体植株中选出具有早衰表型的单株组成定位群体用于基因定位。此外，通过对突变体后代的大田培育及室内营养液水培，考察FG35突变体的表型及相关农艺性状。

表1水稻营养液的配方

Table1.The  formula  of  rice  nutrient  solution

名称 药品 含量（mg/l）

营养液I NH4NO3 91.4

CaCl2 88.6

营养液II MgSO4.7H2O 324

营养液III K2SO4 71.4

营养液IV NaH2PO4.2H2O 40.3

营养液V Na2EDTA.2H2O 46.6

FeSO4.7H2O 34.8

营养液VI MnCl2.4H2O 1.5

H3BO3 0.934

(NH4)6.Mo7O24.4H2O 0.074

ZnSO4.7H2O 0.035

CuSO4.5H2O 0.031

注：营养液调至pH=5.5-6.0，每3天更换一次。

二.实验方法

2.1DNA的提取

1.水稻DNA提取方法

1.1SDS法提取步骤如下：

    1.磨样：取新鲜水稻叶片，用剪刀剪下长度约一厘米的片段`751~文-论+文'网www.751com.cn，剪下5-6片，剩余的叶片带标签放回袋中放入冰箱冷冻保存。将5-6片的叶片片段放入2.0ml离心管中（注意不同水稻的叶片别混在一起），在离心管中放入一颗钢珠，液氮冷却（取用液氮时要注意带防护手套论文网，防止液氮直接接触造成冻伤）后置于研磨仪上研磨1min（研磨好的一组24个离心管要及时打开，防止管盖爆裂，造成水稻粉末的损失）。

   2.水稻粉末离心管中加入400ul提取液于75℃水浴20min（10min时轻轻摇匀一次，注意不要剧烈摇晃，防止水稻DNA发生断裂）。