1.1.1 材料

用于干旱胁迫耐受性实验的拟南芥包括Columbia-0野生型，过表达mTIR1株系35S:mTIR1-7， 35S:mTIR1-9，mTIR1表达量较低株系：35S:MIR393a-6，35S:MIR393b-1株系，以及mTIR1缺失突变体tir1-1均由杭州师范大学陈哲皓老师提供。拟南芥在光照培养室内培养，控制恒温22 ℃，湿度60%，16 h光照/8 h黑暗。其中过表达mTIR1基因对干旱的胁迫的影响，是本文实验考察的重点。

1.1.2 主要试剂和主要使用仪器

主要试剂：70%酒精，10%（体积比）NaClO溶液，无菌水、B5培养基(sigma)。

主要仪器：移液枪(100μL、200μL、1000μL)、高压灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、纯水仪等均由杭州师范大学植物发育实验室提供。拟南芥恒温培养室由杭州师范大学于彦春老师课题组提供。

1.1.3 拟南芥的培养

①灭菌的1.5 ml离心管中根据所需加入适量的拟南芥种子，量不超过离心管容积的1/4。加70%酒精1 ml，混匀3 min，并小心吸除酒精。加10%（体积比）NaClO 1.5 ml混匀10 min后吸除。用无菌水1ml洗种子4~5遍，加入1.5 ml无菌水静置8 min，吸出后再水洗1~2遍。用灭菌的1ml移液器将表面消毒后的种子根据需要点在新鲜培养基上。透气胶带封口后置于4 ℃的冰箱中2 d，破除种子休眠，起春化的作用。

②将含有去除休眠后种子的培养皿置于16 h光照/8 h黑暗的条件下放置培养。光照强度是4000 lx，恒温22 ℃，恒湿60%。

1周大小的幼苗（具两片子叶，根长1~2 cm）移入土壤中栽培。土壤灭菌冷却之后装入塑料花盆中，稍稍压实。镊子在土壤中扎出小孔，将培养基上的幼苗小心夹出，去除粘附在根上的培养基，保持根部垂直嵌入小孔，拨土将根掩埋，苗挺直，叶片朝上。花盆置于托盘之中，托盘中加入新鲜配置的营养液，移苗完成后，托盘加盖有机罩，保湿培养。2 d左右去除有机罩。

③将生长5d的幼苗移到分别含0-PEG8000、30%PEG8000的新鲜培养基上进行培养，每个株系30棵幼苗，每3d统计一次根的生长状况。

④在含有PEG8000的培养基上生长9d后，对幼苗拍照，每组实验重复3次。