1材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌株与质粒
重组质粒pET24a-nuc 由本实验室保藏
大肠杆菌E.coli DH5α 购自北京GenStar 公司
大肠杆菌BL21starTM(DE3)plysS 购自Novagen 公司
1.1.2 酶与试剂盒
甲基化酶Dpn I、DNA Marker、BCA法测定蛋白质浓度试剂盒、2×Pfu PCR StarMix、质粒DNA小提试剂盒、DNA胶回收试剂盒
1.1.3 主要试剂
酵母抽提物、胰蛋白胨、氯化钠、氯化钾、Na2HPO4、KH2PO4、50×TAE缓冲液、硫酸卡那霉素、IPTG、小牛胸腺DNA、MgCl2·6H2O、Tris-HCl (pH 6.8) 缓冲液、6×Sucrose DNA Loading buffer、琼脂糖
1.1.3 培养基和工作液
LB培养基:酵母抽提物0.50 %;胰蛋白胨1.0 %;NaCl 1.0 %;pH 7.0-7.5(一般固体培养基中加入2.0%的琼脂粉)
卡那霉素溶液:取0.050g 硫酸卡那霉素溶于1.0 mL ddH2O中,配成50mg/mL母液,过滤除菌,分装,-20 ℃保存。
IPTG 溶液:取0.238g IPTG 溶于10 mL ddH2O 中(配成0.10 M 母液),过滤除菌后分装,置于-20 ℃保存。
小牛胸腺DNA底物溶液:取0.041 g MgCl2·6H2O和0.001 g小牛胸腺DNA溶于200 µL pH 6.8,1 M的Tris-HCl缓冲液,最后加ddH2O定容至10 mL。
基于热不稳定和热稳定核酸酶序列比对的定点突变研究(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_50226.html