1.2 主要仪器
冷冻离心机 美国贝克曼公司;雪花制冰机 日本三洋公司;MDF-328超低温冰箱 日本三洋科研医疗设备厂;凝胶成像系统 美国BIO-RAD公司;电泳仪 美国Bio-RAD公司;高压灭菌锅 日本三洋公司;Galanz WD700型微波炉 佛山市顺德区格兰仕电器有限公司;DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱 上海精宏实验设备有限公司;TD5A-WS台式低速离心机 长沙湘仪仪器有限公司;电子分析天平 Sartorius公司;超净工作台 苏州净化;移液器 德国Eppendorf;涡旋振荡器 太仓市科教器材厂。
1.3试验方法
1.3.1 RNA提取
(1)收集人的胚肾细胞,PBS洗两次后,加入1mL Trizol试剂,振荡器震荡。
(2)室温放置5min,加入氯仿200ul/mL Trizol。
(3)剧烈震荡15sec,室温放置3min。
(4)12000g,4℃,15min,取上清液至新EP管中。
(5)加入等体积异丙醇(约500ul/mLTrizol),沉淀RNA,涡旋振荡,静置10min(室温)。
(6)12000g,4℃,离心,10min。
(7)吸去上清液,加入75%乙醇(DEPC水稀释,预冷)1mL,振荡。
(8)7500g,4℃,5min。
(9)弃上清液,风干5-10min(超净台)。
线粒体转录因子A超表达载体构建及鉴定(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_55633.html