2.3蔗糖和可溶性总糖的提取与含量测定
用热乙醇提取蔗糖和可溶性总糖,蔗糖含量用间苯二酚法,蒽酮比色法测定可溶性总糖含量。
2.4 蔗糖合酶的提取与活性测定
酶的提取均在0-4℃低温下进行。取20粒-80℃冰箱贮存的籽粒,剥壳去胚后,籽粒加3ml提取介质快速研磨,12,000rpm/min 离心15min,取上清夜作为粗酶液。
酶的提取介质为:100 mmol/L Hepes/KOH (pH7.5),5 mmol/L MgCl2,5 mmol/L DTT,20 mmol/L 巯基乙醇,10 mmol/L 抗坏血酸,2 mmol/L EDTA,1% (w/v)PVP。
酶的反应介质为:0.2ml 的反应介质中含有50mmol/L Hepes/KOH (pH7.5), 5mmol/L Mgcl2 ,3mmol/L UDPG,15mmol/L 果糖,一定量的酶液。酶的活性测定过程参照Roe[4] 的方法,混合物30℃反应30分钟,2mol/L NaOH溶液终止反应,用间苯二酚测定生成的蔗糖的量。酶活力单位为µmol Suc/g pro.min。
蛋白质含量测定:蛋白质的测定用Bradford方法,以BSA为标准蛋白。
3 结果与分析
3.1 不同浓度蔗糖处理对水稻籽粒中内源糖含量的影响
不同浓度的外源蔗糖处理后籽粒内源蔗糖和总糖含量的变化如图1所示。由图1可知,灌浆初期的离体稻穗于不同浓度的蔗糖溶液中培养24小时后,籽粒中蔗糖含量有不同程度的提高。当用低浓度(50mmol.l-1)蔗糖溶液处理时,内源蔗糖含量较对照略有增加但差异未达到显著水平;当用高浓度(100-150mmol.l-1)蔗糖溶液处理时,内源蔗糖含量较对照极显著增加。外源蔗糖浓度为100 mmol.l-1时,籽粒中蔗糖含量最大,为61.6mg.g-1。内源总糖含量在不同浓度蔗糖处理后,与对照相比均极显著增加,其变化趋势与蔗糖含量变化趋势基本一致。
不同浓度蔗糖处理对水稻籽粒中蔗糖合酶活性的影响(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_55897.html