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马铃薯遗传转化体系的优化及转基因植株的获得(2)

时间:2020-08-15 16:26来源:毕业论文
2 材料和方法源自:751:论-文网www.751com.cn 2.1 植物材料与试剂 本实验以马铃薯栽培品种Desiree的无菌苗为植物材料,取苗龄3周的生长状态良好的无菌苗茎段为

2 材料和方法源'自:751:"论-文'网www.751com.cn

2.1 植物材料与试剂

本实验以马铃薯栽培品种Desiree的无菌苗为植物材料,取苗龄3周的生长状态良好的无菌苗茎段为转化的受体材料。

实验所用卡那霉素(Kanamycine,Kan)购于荷兰Sigma公司,头孢霉素(Cefotaxime ,Cefo)购于Amresco公司,乙酰丁香酮(Acetosyringone ,AS)购于BBI公司,所用玉米素(ZT)、赤霉素(GA3)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和6-苄基嘌呤(6-BA)为中国医药集团上海化学试剂有限公司产品。其他试剂均为分析纯。

2.2 菌株与质粒

根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105,含植物表达载体pBIN19/glgB-SBD重组质粒(由本实验室构建)。pBIN19/glgB-SBD质粒上主要携带大肠杆菌淀粉分支酶基因(glgB-SBD)和选择标记基因卡那霉素(Kan)抗性基因nptⅡ。

2.3 主要仪器

低速离心机,水浴锅,剪刀,PCR仪,移液枪,干燥箱,电泳仪,凝胶成像系统等。

2.4 培养基

农杆菌菌液培养选用LB培养基,马铃薯遗传转化涉及的培养基

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