响应面优化法，即响应曲面法（Response Surface Methodology ,RSM），包括试验设计、建立模型、分析模型合理性和寻求最优解等众多试验与统计技术。响应面分析法是降低开发成本、优化实验条件、提高生产效率、解决生产实际问题的更为有效地方法[7-10]。该法在生物发酵方面已有广泛应用。本实验采用Design-Expert软件中的Plackett-Burman设计法、最陡爬坡实验和响应面分析法（RSM）相结合的设计对本实验里氏木霉菌株进行摇瓶发酵培养基的优化，为纤维素酶的生产提供理论基础。

2实验材料与方法

2.1菌种

里氏木霉（Trichoderma reesei）由本实验室保藏。

2.2培养基

2.2.1 试管斜面培养基

马玲薯琼脂(PDA)培养基：取去皮马铃薯200 g，切成小块，加水l 000 ml煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1 000 ml，加葡萄糖20 g，琼脂15～20 g，溶化后分装，12l℃灭菌30 min，25℃培养6d后使用。

2.2.2 种子培养基（g/L）

PDA液体培养基

2.2.3 发酵产酶培养基

麸皮 2g，KH2PO4 2g，(NH4)2SO4 1.4g，MgSO4 0.3g，CaCl2 0.3g，FeSO4·7H2O 5mg，MnSO4 1.6mg，ZnCl2 1.7mg，CoCl2 2.0mg，溶于1000ml 蒸馏水中，自然pH。

2.3主要仪器和试剂源'自:751`!论~文'网www.751com.cn

仪器：

苏州净化SW-CJ-2D型（实用垂直新颖）双人单面净化工作台、EPED实验室级超纯水器、HYG-C型多功能摇床、恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌锅、低温冰箱、PH计、UV759紫外-可见分光光度计、250ml锥形瓶、培养皿、接种环

试剂：

滤纸、3,5-二硝基水杨酸（DNS）、柠檬酸缓冲溶液（PH 4.0）、柠檬酸缓冲液（PH 4.8）、羧甲基纤维素钠

2.4实验方法

2.4.1菌种活化

将在冰箱中保存的里氏木霉菌种接入到PDA平板培养基上，28℃培养5-6d。

2.4.2种子液制备

从平板上挑取生长良好的菌株1-2环，接种到装有100mlPDA液体培养基的 250ml锥形瓶中，在28℃、150r/min的摇床上培养至对数期中后期。