近年来，作为一种优秀的工业微生物，马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）而受到越来越多的关注，因为它的生长速度要比其他真核微生物要明显的快、并且热稳定性也好很多、能利用多种糖发酵生产乙醇的特性[11]。最近，Hong等人使用表达了耐热纤维素酶基因的马克斯克鲁维酵母来利用纤维二糖发酵产酒精，100g/L纤维二糖可以在24小时内转化为43.4g/L乙醇[12]。另外，马克斯克鲁维酵母是天然的菊粉酶的主要来源，能够向胞外分泌较高活力菊粉酶。一株新分离到的马克斯克鲁维酵母（K. marxianus）菌株YS-1在1.5L釜式反应器中，200 rpm搅拌速度，0.75L/min通气量的发酵条件下发酵60 h得到55.4 U/mL的菊粉酶活力。在另一个研究中，同样的酵母菌株在用4.0%芦笋根茎中得到的粗菊粉作为产酶培养基，在30°C、200 rpm搅拌速度、0.75L/min通气量的发酵条件下发酵60h得到50.2U/mL的菊粉酶活力。在生物反应器中的菊粉酶活力几乎是在摇瓶培养中使用最初基本培养基时的6倍[11]。马克斯克鲁维酵母的基因组中本身具备β-葡萄糖苷酶基因，可以向胞外分泌一定量的β-葡萄糖苷酶，能够在以纤维二糖为单一碳源的培养基上生长[13]。Raynal等人克隆了具有分泌β-葡萄糖苷酶能力的克鲁维酵母中的BG基因并成功的在大肠杆菌和酿酒酵母细胞中表达，使酿酒酵母具有一定的水解纤维二糖的能力[14]。

马克斯克鲁维酵母显微照片

2  材料与方法

2.1  材料

2.1.1  供试菌株

马克斯克鲁维酵母strain1（实验室保存）

2.1.2  主要仪器

LS-78HJ立式压力蒸汽灭菌器：江阴滨江医疗设备有限公司；

SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台：苏州净化设备有限公司；

GNP-9080隔水式恒温培养箱GNP-9080型：上海精宏实验设备有限公司；

HYG-C多功能摇床HYG-C：苏州市培英实验室设备有限公司；

HH-S恒温水浴锅:金坛市亿通电子有限公司FA2004B电子天平；

Nikon ECLIPSE E100生物显微镜；

TDL-5-A台式离心机：上海安亭科学仪器厂制造；

DHG-9420B型电热恒温鼓风干燥箱：上海三发科学仪器有限公司；

UV759紫外-可见分光光度计:上海精科；

2.1.3  培养基(质量分数,%)源'自:751`!论~文'网www.751com.cn

 PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、MgSO4 0.5g、K2HPO4取1.5g、蒸馏水取1000mL，pH自然。

 查氏培养基：葡萄糖取30g、NaNO3 2g、K2HPO4 1g、KCl 0.5g、MgSO4•7H2O 0.5g，FeSO4•7H2O 0.01g，琼脂 15g，蒸馏水 1000ml，自然PH。

 羧甲基纤维素钠培养基[15]：羧甲基纤维素钠10g，NaNO3 2g ，K2HPO 31g，KCl 0.5g，MgSO4 0.5 g，FeSO4 0.01 g，琼脂取15 g，蒸馏水取1000ml，pH 自然。

 刚果红染液：取刚果红1 g，加水至1000 ml使其充分溶解制成0.1％溶液。

 发酵培养基：麸皮 1.00g，KH2PO4 2.00g，（NH4）SO4 1.4g，MgSO4 0.30g，CaCl2 0.34g，FeSO4•7H2O 5.00g，MnSO4•H2O 1.6g，ZnSO4•7H2O 1.4mg，CoCl2 2.00mg，定容到1L，pH值自然。 

马克斯克鲁维酵母纤维素酶活力测定Marxianus Cellulase Activity Assay(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_58446.html