2 材料与方法

2. 1 实验材料

供试品种为具较高结实率的超级稻两优培九。单本植，田间管理一致，同一般大田栽培。始穗期选择生育进程和长势长相基本一致的主茎进行标记，待稻穗穗颈节露出剑叶鞘1~2d，取样进行穗培养。

2. 2 水稻穗离体培养

于始穗期选择生育进程和长势长相基本一致的主茎进行标记，待稻穗穗颈节露出剑叶鞘1~2d（花后6天），取样进行穗培养。采用Singh等[5]方法，在无菌室中先用1%（V/V）次氯酸钠溶液对单茎穗穗颈节以下部分进行表面消毒，在无菌水中剪去距穗颈节11～12cm以下部分，然后在超净工作台将单茎穗转移到盛有50mL无菌培养液的玻璃管中，用无菌医用棉封口，每处理重复6次。基本培养基成分中矿质元素成份及数量同梁建生等[6]报道。培养玻璃管用铝箔包裹，在暗中培养，穗培室温度为25℃±1。

2.3 蔗糖和可溶性总糖的提取与含量测定源'自:751`!论~文'网www.751com.cn

用热乙醇提取蔗糖和可溶性总糖，蔗糖含量用间苯二酚法，蒽酮比色法测定可溶性总糖含量。

2.4 蔗糖合酶的提取与活性测定

酶的提取均在0-4℃低温下进行。取20粒-80℃冰箱贮存的籽粒，剥壳去胚后，籽粒加3ml提取介质快速研磨，12，000rpm/min 离心15min，取上清夜作为粗酶液。

酶的提取介质为：100  mmol/L Hepes/KOH (pH7.5)，5 mmol/L MgCl2，5 mmol/L DTT，20 mmol/L 巯基乙醇，10 mmol/L 抗坏血酸，2 mmol/L EDTA，1% (w/v)PVP。

酶的反应介质为：0.2ml 的反应介质中含有50mmol/L Hepes/KOH (pH7.5)， 5mmol/L Mgcl2 ，3mmol/L UDPG，15mmol/L 果糖，一定量的酶液。酶的活性测定过程参照Roe[7] 的方法，混合物30℃反应30分钟，2mol/L NaOH溶液终止反应，用间苯二酚测定生成的蔗糖的量。酶活力单位为µmol Suc/g pro.min。

蛋白质含量测定：蛋白质的测定用Bradford方法，以BSA为标准蛋白。