泡核桃（胡桃属），一种生长很快的落叶乔木，是生长在中国西南地区西藏，四川，云南，与贵州省山区的本土植物（Wu et al. 1999）。泡核桃的种子在膳食营养方面被赋予很高的价值，他们的种子壳已经长期被用作用于治疗食管癌，胃癌，心脏病和肺癌的民间药物（Liu et al. 2010）。泡核桃的种子壳作为农业和食品工业残渣，由于其药学性质，是发展潜在的增值药品，保健品，以及化妆品的丰富资源（Ito et al. 2007）。原先关于泡核桃新鲜果壳原的研究取得了9种α-萘满酮衍生物（Liu et al. 2010）。然而，据我们所知，从来没有关于这一物种抗酪氨酸酶活性的报道。为了验证泡核桃的传统作用，并阐明其药理作用，调差研究了该植物种子壳的70％丙酮提取物，以鉴定这些提取物中的化学成分对抑制酪氨酸酶的影响。本文阐明从泡核桃提取的五种低分子量没食子酰基单宁酸对酪氨酸酶的抑制作用。   

2  实验试剂材料与仪器 源.自|751,:论`文'网www.751com.cn

2.1  试剂材料准备

B16F10小鼠黑色素瘤细胞，DMEM培养基， PBS(磷酸盐缓冲液)，MTT(以PBS配制成5 mg/ml，抽滤除菌，保存在4℃)，5×第一链缓冲液，二硫苏糖醇（DTT），裂解缓冲液，TBST缓冲液。

2.2  主要仪器

96孔板，细胞培养箱，离心机，酶联免疫检测仪，微板读数器，PCR仪，ECL检测试剂盒。

    1HNMR（400 MHz）和 13C-NMR（100 MHz）的光谱记录在使用Bruker Avance DPX 400光谱仪以TMS作为内标物的MeOH-d4上。 EI和实际的FAB-MS光谱使用Micromass AutospecM363光谱仪完成，而且MALDI-TOF-MS光谱以Model Voyager- DESTR光谱仪衡量。

薄层色谱法（TLC）的分析在DC-Plastikfolien Cellulose F (Merck Co. )板上进行和使用t-BuOH-HOAc-H2O (3:1:1, v/v/v, solvent A) 和 HOAc-H2O (3:47, v/v, solvent B)拓展。TLC斑点通过UV光（254和365 nm）检测,用1％的FeCl3（在EtOH中）溶液喷涂，然后加热。 

3　实验内容

3.1  细胞系和细胞培养

  将从美国典型培养物保藏中心获得的B16F10小鼠黑色素瘤细胞接种于Dulbecco改良过的Eagle培养基（DMEM）中，该培养基补充有10％的磷酸盐缓冲液（PBS），100 U/ml的青霉素和100 µg/ml的链霉素，在含有95％空气和5％CO2的37℃的潮湿环境中。