2  材料与方法源[自-751*`论/文'网·www.751com.cn

2.1  试验材料

1.试验材料：大豆中黄13号，由淮安农科院提供。

2.根施试剂：本试验室研发配制的甘氨酸络合态钼肥。

2.2  试验方法

1.幼苗培育

(1) 首先将大豆种子放在1%次氯酸钠中浸泡30min后用去离子水冲洗多次，把种子包在干净纱布里，在清水中浸泡3-4小时，再用50-55℃温汤浸种15min，置于生化恒温培养箱中，24¬-35℃下催芽2-3d，每隔6小时翻动一次，并注意补充水分。

(2) 将长势一致的种子转移至盛有清水的培养盆中，待长出第一片真叶时，更换改良霍格兰氏营养液（不添加钼酸钠）继续培养，每盆8株，甘氨酸——钼酸设20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L五个水平，共三个处理每个处理三个重复；以纯水为对照同样是三个重复，共48盆。

(3) 各盆加入等量相同纯营养液培养，营养液每隔5天更换，出现第三片真叶后，各处理置换成对应浓度的添加甘氨酸钼肥的营养液进行培养，对照组一直只用纯的营养液培养。每三天置换一次各培养液。

(4) 培养两周后测定各组的相关生理指标。

2.叶绿素含量 测定：

(1) 取材及试验方法：

A.叶片的选取：取大豆第三片或第四片同一水平层次的叶片，在水中洗净，然后用吸水纸吸干叶片表面的水分。为了提高试验的精确度。我们在取样时仅在每片叶左右中间对称部位并且避开叶柄叶脉用打孔器打孔，每盆取三片叶片，每片打孔两个，形成小圆片。把同一边的叶片剪成一毫米宽度的细丝状，各放入试验组和对照组相对应的刻度试管中。

B.叶绿素的浸提：

试剂：丙酮乙醇混合液，丙酮：乙醇=2:1。

处理方法：用浸提液将剪碎的叶片定容至10ml，封管。立即将已经加过试剂的刻度试管放入避光条件的恒温箱中（25℃），直至细丝完全变白为止（过夜即可）。中间轻轻摇晃几下，使其充分接触，加快反应。

C.叶绿素含量的测定：为弥补可能由于溶剂挥发带来的损失，用混合试剂重新定容至10毫升，晃匀后，将管内溶液倒入比色皿中测定叶绿素提取液的光吸收值。以丙酮无水乙醇混合试剂为空白，在663nm、645nm下测定光吸收值，并记录。再根据Arnon公式计算叶绿素含量。