自Quastel和Scholefield[6]首次筛选得到产物为NO2—的异养硝化菌株以来，人们逐渐发现异养硝化现象在不同的环境中广泛存在。目前已发现芽孢杆菌（Bacillus cereus）[7]，产碱假单胞菌（Pseudomonas alcaligenes）[8]，粪产碱菌（alcaligenes faecalis）[9]，不动杆菌（Acinetobacter sp.）[10]等多个属的细菌具有高效的异养硝化能力。

西溪国家湿地公园被誉为是“杭州之肺”，是罕见的城中次生湿地。在调节气候、净化水质、降解污染物和保护生物多样性方面起着重要作用。本实验从西溪湿地水体沉积物中分离出1株高效异养硝化菌，对其脱氮特性进行了初步研究，并从形态、生理生化及16S rRNA序列测定对菌株进行鉴定，并对其脱氮特性进行研究。以期为微生物处理污水、西溪湿地的开发整治提供一定参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源

    本实验所研究菌株分离自西溪湿地水体沉积物。

1.1.2 培养基

    异养硝化培养基：( NH4)2 SO4 1g，维氏盐溶液50 mL，柠檬酸三钠9g，加水溶解，补充蒸馏水至1 000 mL，调节pH至8.0，分装后，121℃灭菌20min。维氏盐溶液：K2HPO4 5.0 g，MgSO4·7H2O 2.5 g，FeSO4·7H2O 0.05 g，MnSO4·4H2O 0.05 g，NaCl 2.5 g，溶解后加水定容至1000 mL。

    LB液体培养基：胰蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母提取物5g。

牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏10g/L，NaCl 5g/L，琼脂15～20g/L，蛋白胨10g/L，pH7.0~ 7 .2。

脓青素产生试验培养基：蛋白胨20g，MgSO4·7H2O20g，甘油10g，FeSO4·7H2O0.01g，K2HPO40.4g，补充蒸馏水至1 000 mL，调节pH7.0-7.2。分装试管，每管4ml，121℃灭菌20min。

丙二酸盐利用试验培养基：酵母膏1.0g，( NH4)2SO42.0g，K2HPO4 0.6g，KH2PO40.4g，NaCl2.0g，丙二酸钠3.0g，溴百里酚蓝0.025g，补充蒸馏水至1 000 mL，调节pH7.0-7.4。分装后，121℃灭菌20min。

西蒙氏柠檬酸盐培养基：NaCl5.0g，MgSO4·7H2O0.2g，( NH4)H2PO41.0g，K2HPO4·3H2O1.0g，柠檬酸钠2.0g，溴百里酚蓝1%水溶液10ml，琼脂15g。加热溶解，调节pH至7.0后加入指示剂。分装后，121℃灭菌20min。源]自=751-^论-文"网·www.751com.cn/

糖、醇类发酵培养基：蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，琼脂7.5g，溴百里酚蓝1%水溶液3ml，终浓度为1%的待测糖、醇，补充蒸馏水至1 000 mL，调节pH7.0-7.2。分装后，112℃灭菌30min。本实验所用到的糖、醇包括葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、木糖和甘露醇。

甲基红（V-P）试验培养基：蛋白胨5g，K2HPO45g，葡萄糖5g，补充蒸馏水至1 000 mL，调节pH至7.0-7.2。分装后，115℃灭菌30min。

七叶灵水解试验培养基：终浓度为0.1%的七叶灵+牛肉膏蛋白胨液体培养基和0.05%的柠檬酸铁。分装后，121℃灭菌20min。

硝酸盐还原试验培养基：终浓度0.1%的KNO3+牛肉膏蛋白胨液体培养基，调节pH7.0-7.6。分装后，121℃灭菌20min。

反硝化试验培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基+终浓度1%的KNO3，调节pH7.2-7.4。分装后，121℃灭菌20min。

吲哚试验培养基：1%胰胨水溶液，调节pH7.2-7.6。分装后，115℃灭菌30min。

苯丙氨酸脱氨酶试验培养基：NaCl5g，酵母膏3g，DL-苯丙氨酸2g，Na2HPO41g，琼脂15g，补充蒸馏水至1 000 mL，调节pH7.0。分装后，121℃灭菌20min。

卵磷脂酶试验培养基：取100ml灭菌后的牛肉膏蛋白胨液体培养基冷却到50℃左右，加入20ml卵黄悬液（无菌条件下取鸡蛋卵黄加入等量灭菌好的生理盐水），混匀后倒平板，过夜即可使用。

1.1.3主要试剂和仪器设备文献综述 高效异养硝化菌的筛选及鉴定(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_66024.html