LMO1在前庭和耳蜗的毛细胞中特定表达； LMO4是最先在耳泡背外侧表达的，而且LMO4的表达始终是在胚胎形成过程中半规管、囊斑和螺旋神经节上。因此，LMO1到LMO4的分区域表达与内耳的形态形成有着密切的联系。尽管，LMO1到LMO4在小鼠组织中的表达模式已经有很多报道和研究，但是LMO1到LMO4在小鼠内耳中的表达模式仍处于探索阶段。

为了了解LMO4和LOM1在内耳发育中的作用，我们需要以lacZ的敲入和有条件的敲除和用cre-loxp系统来处理来灭活LOM1和LOM4（Deng et al., 2010）。基本上敲除后都表现了一种相似的表现型，其中前庭区域出现严重的畸变（Deng et al., 2010）。形态基因的缺陷是由于在耳泡外侧LMO4的未表达引起的，进而导致了早期结构的缺陷（Deng et al., 2010）。然而，耳蜗在缺失LMO4的小鼠中也可以形成。只是形成的耳蜗比起野生型来说比较小。另外，在缺失LMO4基因的前提下，螺旋器的发育也是可以检测出来的。

目前，我们已经明确LMO4在耳蜗管侧面的那片新颖的感觉区域其起负调节作用。我们发现LMO4在正在发育的小鼠耳蜗中会持续不断的表达，而且小鼠LMO4的失活会导致在耳蜗侧面形成异常的螺旋器。但是比较有趣的是，这种异常的螺旋器保留了正常螺旋器的功能，在结构上也与正常螺旋器高度相似，并且正常的螺旋器中所有的细胞类型在这种异常的螺旋器中也都存在，它其中包括内外毛细胞、支持细胞和其他非感觉的特殊的细胞类型。在目前的研究中，这是首个异常的螺旋器可以通过操纵LMO4基因再生的案例。这种发现对于听力缺陷的治疗来说具有重大的意义。

1 材料与方法

1.1  实验材料

小鼠：条件性敲除LOM1和LOM4基因的小鼠，并把在其上观察到阴道栓的一天定义为胚胎天（E0.5）。

1.2  实验方法 

1.2.1基因型的鉴定

碱裂解法提取DNA

⑴剪切小鼠尾部0.3cm并将其置于PCR管中； 

⑵加入50mM的氢氧化钠溶液100μl ；

⑶95℃下加热10min后混匀；

⑷ 加入1M Tris盐酸10μl(pH 8.0) 混匀 ；

⑸12000转每分钟离心5分钟；

⑹加入100μl TE (pH 8.0)将最终体积调成200μl；

⑺用其中的 1 μl来做PCR反应 

PCR

Premix        10μl

Primer(F)     1μl

Primer(R)     1μl

H2O           7μl

DNA           1μl

将上述液体都置于专用的PCR管中（液体一般从多到少添加）后放置到PCR仪器中，之后用凝胶成像的方法来鉴定基因型

1.2.2组织准备文献综述

（1） 固定：固定样本在4℃时在4％PFA(可溶性聚四氟乙烯)在1X PBS(磷酸盐缓冲液)，pH值为7.2；

建议固定时间：

胚胎至E14.5：头部固定在固定液18-24小时；

从E15.5到P3：耳、眼等组织需在固定液中固定30分钟，脑组织则需24小；

从P4：灌注固定液的动物，提取后固定眼睛和耳朵等组织需时30分钟，大脑需过夜；

（2）在4℃下用PBS清洗样品两遍每遍15分钟； 

（3）在组织中加入含蔗糖30％的PBS溶液，直到它们下沉，目的是干燥组织利用梯度蔗糖为10％，20％，30％；（若是成体小鼠可以先将其组织浸于EDTA中脱钙）

（4）将组织包埋于冰冻切片包埋剂（O.C.T）中，将其放置与冰箱中冷冻； 

食物中残留抗生素对Lmo1Lmo4条件性敲除小鼠内耳形态的变化及其功能的影响(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_66045.html