1 材料与方法

1.1  实验材料

实验材料于2015年4月取自实验室现存的经驯化培养后的铁皮石斛试管苗。此石斛苗原产自浙江省富阳的山林，采集后经消毒、无菌操作已在实验室无性繁殖多代，性状较为稳定。

1.2  培养方法 

1.2.1 丛生芽的增殖

配制两种不同比例激素的诱芽培养基各1L，共分装于40个（直径约6cm，高约9cm）玻璃瓶中，进行高压蒸汽灭菌，冷却凝固待用。在经灭菌通风后的超净台中，用镊子分离实验室原有的试管苗上的新生芽，2~3个芽为一株，接种到不同的诱芽培养基中，每瓶接种4株，见光培育。每隔5天记录芽体的增殖数量和茎干长度，分别得出平均值，从而比较两种培养基中苗的生长情况。

诱芽培养基：①1/2MS+0.2mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1NAA；

②1/2MS+0.1 mg·L-1TDZ，pH值均调至5.8~6.2，密封膜封口。

1.2.2 丛生芽的继代增殖

培养约一个月后，可观察到有大量芽体生成。将增殖后的丛生芽转到灭完菌的超净台上操作，用镊子继续分离开新生芽体，2~3个芽为一株，接种到上一步实验中筛选出来的较优的诱芽培养基中进行继代培养，密封膜封口。操作完毕，放入25℃的恒温室中见光培养一个月。

待培养到芽体数量较多无法计数，或者培养基出现轻微凹陷时，需要及时更换培养基。大致间隔期为一个月。

1.2.3 幼苗生根源]自=751-^论-文"网·www.751com.cn/

不断继代培养直至观察到大部分幼芽已长成较为健壮的幼苗，挑选大小相似、叶片完整、平均株高约0.5~0.8cm的幼苗的转到超净台上操作，将幼苗分成1~2个苗为一株，分别移入四种不同的生根培养基中。每瓶培养基中接入4株，透气膜封口。操作完毕放入25℃的恒温室中见光培养，约三周后即可观察到幼根的生长。一段时间后统计幼苗的生根率，平均根数和平均根长，比较不同生根培养基的培养效果。

生根培养基：①1/2MS+0.1 mg·L-1NAA；

②1/2MS+无激素；

③1/4MS+0.1 mg·L-1NAA；

④1/4MS+无激素。（pH值调至5.8~6.2，透气膜封口）

1.2.4 炼苗

从上一步实验的所有生根培养基中挑选出较为健壮的生根幼苗，以株高1cm以上、每株3条根以上者为优。在移栽之前先进行炼苗，在避光30%，温度在25℃~28℃，湿度在60%左右的自然环境中将瓶盖打开，让幼苗适应室内的自然温度及湿度。等到幼苗的叶色转变为浓绿，根部发白时，较适宜进行移栽[11]。

移栽前，先用镊子轻轻地将带有培养基的幼苗完整取出，用自来水洗掉附着于根部的培养基，挑选出相似大小的种苗，测量每株幼苗的根数和根长，并得出平均值。