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复合菌剂对四溴双酚A胁迫下大豆幼苗生长及抗氧化酶的影响(4)

时间:2017-05-14 09:30来源:毕业论文
(3) 绘制标准曲线 将上述所配溶液依次稀释出梯度性的溶液浓度。依次是每mL含有糖0 mg、5 mg、10 mg、20 mg、30 mg、40 mg、50 mg、60 mg、70 mg、80 mg、90 mg、100 m


(3) 绘制标准曲线
    将上述所配溶液依次稀释出梯度性的溶液浓度。依次是每mL含有糖0 mg、5 mg、10 mg、20 mg、30 mg、40 mg、50 mg、60 mg、70 mg、80 mg、90 mg、100 mg。与测定可溶性糖含量的测量方式一样测定OD值,以所读取的OD值绘制标准曲线。
1.5.2.3 结果计算
              可溶性糖含量%=C×V/(W×1000000)×100%
     式中:V:植物样品稀释后的体积(mL);C:待测液的糖含量(μg/mL);W:大豆幼苗的鲜重(g)
1.5.3 SOD活性的测定
1.5.3.1 实验试剂
    0.1 mol/L的Tris溶液:1.21 g Tris+100 mL蒸馏水。
0.1 mol/L的HCl溶液:取0.1 mL的浓HCL,加蒸馏水溶解成6 mL。
50 mmol/L的连苯三酚溶液:取0.1 mol/L HCl溶液20 μL,用蒸馏水稀释到2 mL,得1 mmol/L盐酸溶,再往里加连苯三酚14.6 mg。
1.5.3.2 操作步骤
(1)酶液提取:取大豆幼苗叶片0.1 g在事先冷藏过的研钵内,剪碎后放入Eppendoff管中,加入1 mL(分三次加)pH为8.3的Tris-HCl缓冲液,低温下用研磨棒研磨成浆状,于4 ℃,12000 r/min下离心15 min,将离心好的上清液分别装在事先标记过的Eppendoff管里面,将其保存在-18 ℃的冰箱中备用。
(2)酶活性的测定:
表1 连苯三酚四氧化法测SOD样品测定液配制表
试剂    对照管    样品管
Tris-HCl缓冲液    8mL    80mL
粗酶液    -----    15µL
连苯三酚溶液    -----    10µL
HCL    10µL    -----
总量    8µL    8mL
在放入连苯三酚后开始计算时间,快速混匀,尽可能地让提取液和底物反应,倒进比色皿内进行比色,用分光光度计测量吸光值,每30 s读取一次混合液325 nm下的吸光值,连续读6 min。
1.5.3.3 结果计算
 酶活力=[(0.070-A325nm/min)/0.070)×100%)/50%×反应液总体                积×(样液稀释倍数/样液体积]
              =(1-A325nm/min/0.070)×568.8888
1.5.4 POD活性的测定
1.5.4.1 实验试剂
0.02 mol/L的愈创木酚:取0.11 mL愈创木酚加水定容到50mL。
0.04 mol/L的过氧化氢:取80 µL 30%过氧化氢加水到20mL,即配即用。0.01mol/LpH7.0磷酸缓冲液:61.0 mL0.1 mol/LNa2HPO4与39.0 mL 0.1 mol/L NaH2PO4混合加蒸馏水至1000 mL。
1.5.4.2 操作步骤
(1)粗酶液的制备:称取0.1 g洗净的大豆幼苗叶片,剪碎后放入Eppendoff管中,加入少量石英砂和1 mL(分三次加)pH为7.0的PBS,低温下用研磨棒研磨成浆状,于4℃,12000 r/min下离心15 min,将离心好的上清液分别装在事先标记过的Eppendoff管里面,将其保存在-18℃的冰箱中备用。
(2)大豆幼苗叶片CAT活力的测量:取出比色杯,加入3.0 mL 0.01 mol/L pH 7.0磷酸缓冲液和0.05 mL 0.02 mol/L的愈创木酚,作为调零空白;另一只加入3.0 mL 0.01 mol/L pH 7.0磷酸缓冲液和0.05 mL 0.02 mol/L的愈创木酚和上述粗酶液1 mL,加好混合物后充分混匀,于试管内放进10 µL 0.04mol/L的H2O2溶液,立即混匀。用分光光度计测量吸光值,在470 nm下比色测定OD值,读出第2 min,第3 min的吸光值。 复合菌剂对四溴双酚A胁迫下大豆幼苗生长及抗氧化酶的影响(4):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_6939.html
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