利用底物和产物光吸收性质的不同,可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。几乎所有的氧化还原酶都使用该法测定。该法测定迅速简便,自动扫描分光光度计的使用对酶活力的快速准确的测定提供的极大的方便。
④旋光法 利用物质的旋光性质测定溶液浓度的方法。许多物质具有旋光性(又称光学活性),如含有手征性碳原子的有机化合物。当平面偏振光通过这些物质(液体或溶液)时,偏振光的振动平面向左或向右旋转,这种现象称为旋光。偏振光旋转的角度称为旋光度,旋转的方向与时针转动方向相同时称为右旋,以“+”号表示;如与之相反,则称为左旋,以“-”号表示。
⑤酶偶联分析 某些酶本身没有合适的测定方法,但可偶联另一个酶反应进行测定。其基本方法为:应用某一高度专一性的工具酶使被测酶反应能继续进行到某一可直接连续且简便准确测定阶段的方法。文献综述
⑥放射测量法 是酶活力测定中较常用的一种方法。一般用放射性同位素标记底物,在反应进行到一定程度时,分离带放射性同位素标记的产物并进行测定,就可测知反应进行的速度。
1.5 本实验研究方向及意义
扁桃酸(化学式:C8H8O3),英文名Mandelic acid,又被叫作苦杏仁酸、苯乙醇酸,学名为α-羟基苯乙酸,是一种白色斜方片状结晶,曝光易变质分解。易溶于异丙醇和乙醚,溶于水和乙醇。扁桃酸及其衍生物在体内是肾上腺素和去甲肾上腺素被单胺氧化酶和儿茶酚胺-O-甲基转移酶的代谢产物。扁桃酸分子中有一个手性碳原子,因此有(R)型和(S)型两个对映体。(R)-型在 160°C 逐渐外消旋化。异构体有甲酚酸(2-羟基-3-甲基苯甲酸)和2-甲氧基苯甲酸。扁桃酸主要用于合成中间体,医学上更是用于合成环扁桃酸酯、匹莫林等药物,也可以用作防腐剂。[19]有机合成中扁桃酸是很好的对映体胺、醇的拆分试剂,可作为不对称还原、Diels-Alder反应的手性模板,也可作为手性反应的起始物。扁桃酸是扁桃苷的水解产物之一,最早也是由 J. W. Walker 和 V. K. Krieble在1909年通过用稀盐酸水解扁桃苷而制得。[20]现在可有以下方法制取:1、由苯甲醛与氰化钠和亚硫酸氢钠水溶液反应而得。这个过程中苯甲醛先与亚硫酸氢钠生成醛的亚硫酸氢钠加成物,它被氰基取代生成扁桃腈,最后扁桃腈用酸水解得到扁桃酸。2、由异丙苯法制苯酚的副产苯乙酮氯化得二氯苯乙酮,然后与稀碱反应水解,得扁桃酸。3、由苯与乙醛酸在乙酸和硫酸作用下反应制备。[21]
S-扁桃酸脱氢酶是S-扁桃酸的特异性酶,通过其特性的研究,我们可以更清楚的掌握反应动向,控制反应进程,无论在工业上,还是在医学上,抑或在教学方面,都有着一定的意义和影响。就整体研究水平而言,国内外对其处于基础的阶段。
直接电化学法测定并研究扁桃酸脱氢酶的活性(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_70828.html