1.6.3 氧化还原酶活性的检测方法

几乎所有的氧化还原酶都使用分光光度法测定酶的活力。分光光度法利用底物和产物光吸收性质的不同，可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。NADH在340nm波长下有特征吸收峰，而NAD+在该波长下无吸收。这种测定方法既迅速又简便。

1.7  研究工作主要内容

本课题的研究内容如下：

(1) 培养代谢R-扁桃酸的菌种49-F14.1（实验室筛选得到），改变培养时间，使用不同pH值的缓冲液，采用不同的破碎方法，即超声破碎法和反复冻融法，从破碎细胞的提取液中检测是否有R-扁桃酸脱氢酶活力。源:自~751·论`文'网·www.751com.cn/

(2) 培养能降解R-扁桃酸的菌种H2、F16、K18、C4、J8.1，改变培养时间，使用不同pH值的缓冲液，从细胞提取物中检测是否含有R-扁桃酸脱氢酶和NADH氧化酶的活力。

(3) 培养酵母，从破碎细胞提取液中检测是否含有R-扁桃酸脱氢酶的活力。

(4) 培养菌种H2，研究培养基中添加扁桃酸对产NADH氧化酶有无影响。通过超声破碎、硫酸铵沉淀、阴离子交换层析等纯化手段分离得到NADH氧化酶，测定其最适反应温度和最适pH值，并测试其pH稳定性。