1.4.2. 从已破碎组织中提取粗酶液的方法

现将常见的方法及每种方法的优缺点列表如下。

表1-1 常见从组织中提取粗酶液的方法及它们的优缺点

方法名称 优缺点描述

盐析法（一般用硫酸铵） 操作简单，但有时候加入盐后会引起pH的较大改变，需要实现调好pH，防止酶变性失活，而且盐析之后往往酶液中离子强度较高，需透析

有机溶剂沉淀法（常用的是乙醇） 操作方便，而且一般有机溶剂可以回收反复利用。缺点是有些有机溶剂的毒性以及易使蛋白质失活限制了它的应用

等电点沉淀法 成本低、操作简便，但一般蛋白质的等电点在偏酸性的范围内，如果这种蛋白质的pH耐受性不好，则适用这种方法

聚乙二醇沉淀法 操作简便、条件温和，而且聚乙二醇还对蛋白质有保护作用，提取蛋白质也比较完全[9]源:自~751·论`文'网·www.751com.cn/

双水相分离法 放大容易，一般10ml离心管的实验结果可以直接方法到工业规模；含水量大，且不易引起蛋白质的失活；不存在溶剂残留问题。缺点是影响因素较多，比如浓度、pH、离子强度等，所以前期摸索最佳双水相系统时比较繁琐

综上所述，每种方法都有各自的优缺点，对于本实验中用的提取材料鸭肝，将其破碎制成粗提液后，由于鸭肝组织中含有大量的脂肪，所以其粗提液粘稠度很高，对于上述的前四种方法，用来处理鸭肝粗提液时，或是没有办法使粗提液分为明显的沉淀和上清， 或是使几乎所有的蛋白质都沉淀下来了，对于本实验中酶活的提取没有实际的应用价值。而双水相分离法以及后来在本课题实验中应用的聚乙二醇——硫酸铵沉淀法则可以在一定程度上解决这个问题，只有解决这一步，才能继续进行后续的酶活提取步骤。