试剂配制:文献综述
1.红细胞稀释液(Hayem稀释液)
NaCl (维持渗透压) 0.5g
Na2SO4 (使溶液比重增加,红细胞均匀分布,不易下沉 2.5g
HgCl2 (固定红细胞并防腐) 0.25g
蒸馏水 加至100ml
2.白细胞稀释液
冰醋酸 (破坏红细胞) 2.0ml
1%龙胆紫或1%美蓝(染白细胞核呈淡蓝色,以便识别) 1ml
蒸馏水 加至100ml
3.血小板稀释液(许汝和氏含尿素稀释液)
尿素 (维持渗透压) 10~13g
柠檬酸钠 (防止血小板凝集) 0.5g
40%甲醛溶液(防腐) 0.1ml
蒸馏水 加至100ml
(注意:先将尿素、柠檬酸钠溶于蒸馏水中,然后再加甲醛溶液。)
2.2.2 实验步骤
(1)采血与稀释
用5ml移液管吸取3.98ml红细胞稀释液并放入1号小试管中备用,用1ml移液管吸取0.38ml白细胞稀释液并放于2号小试管中备用,再用2ml移液管吸取2ml血小板稀释液并放入3号小试管中备用。
实验采用心脏心脏穿刺采血法,将棉球蘸取适量乙醚用于麻醉小鼠,待小鼠麻醉完成, 用5.0 mL注射器,针头紧贴剑突下,以角度25°~30°斜行向上进针刺入皮下,边进针边缓缓回抽针管,针尖穿过横膈膜继续斜行刺入2.5~3.0cm,一旦感到针管有轻微搏动,表明针尖已进入心脏内,血液借心脏跳动的力量涌入注射器内[8],然后用一次性毛细血管分别三次准确吸取血液20µl、20µl和10µl,擦净管外沾染之血,依次分别将滴管插入放有上述盛有稀释液的试管底部,轻轻吹出血液,并用上清液清洗毛细吸血管2~3次,轻轻摇动试管1~2min,使血液与稀释液充分混匀。
(2)血细胞计数板
计数板是一块刻有一定面积刻度的长方形厚玻璃板,将盖玻片(与计数板同时配套购置)放入计数板中央,用洁净玻璃棒蘸取少量已稀释混匀后的血细胞悬浮液,于盖玻片边缘一次性滴入计数室内,使之灌满,静置2~3min后,待细胞下沉后进行计数。计数血小板的血细胞悬液应静置15min。滴入计数室内的细胞悬液不能过多或过少。在计数红细胞、白细胞和血小板时可各使用一个计数室。来.自/751·论|文-网·www.751com.cn/ 小鼠血液组成成分的观察(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_73143.html