土样：从淮阴师范学院南苑食堂和淮安面粉厂取样。

2．2培养基

2．2．1 初筛平板培养基

生马铃薯淀粉30 g，NaNO3 2 g，KH2PO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，KCl 0.5 g，FeSO4 

0.01 g，琼脂20 g，定容至1 L，121℃灭菌20 min。在105℃条件下将生马铃薯淀粉干热灭菌2 小时，并在65℃条件下无菌操作加入。

2．2．2增殖培养基

生马铃薯淀粉20 g，NaNO3 3 g，KH2PO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，KCl 0.5 g，FeSO4 

0.01 g，调节pH值至5.5～6，定容1 L。培养条件：250 mL三角瓶中，恒温30℃，摇瓶200 r/min，培养3～4 天。

2．2．3液体发酵培养基

生马铃薯淀粉2 g，蛋白胨2 g，NaNO3 3 g，KH2PO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，定容至1 L，121℃灭菌20 min。在105℃条件下将生马铃薯淀粉干热灭菌2 小时，并在常温条件下无菌操作加入。250 mL的三角瓶，装液量为50 mL。培养温度30℃，摇床转速为200 r/min。

2．2．4试管斜面培养基

生马铃薯淀粉30 g，NaNO3 2 g，KH2PO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，KCl 0.5 g，FeSO4 0.01 g，琼脂20 g，定容至1 L，121℃灭菌20 min。

2. 3主要仪器设备

上海信衡电子有限公司ES-B-5000型电子天平，太仓市博莱特实验仪器厂HD-930型组合式全温摇床，山东省科学院生物研究所SBA-40C型生物传感分析仪，艾本德中国有限公司5810R台式高速大容量冷冻离心机。来.自/751论|文-网www.751com.cn/

2．4方法

2．4．1菌株的分离筛选

富集培养：在无菌三角瓶装入10 g土样，并加入150 mL增殖培养基，震荡制成土壤悬液后，需静置片刻，将其放入摇床， 摇床参数设置为30℃，150 r/min，将三角瓶置于摇床震荡，培养3天。

初筛：将初筛平板培养基在121℃条件下灭菌20分钟，冷却到60℃，平板趁热倒出。在三角瓶中装入富集培养基，各取1 mL菌液。在梯度稀释时需要用无菌水进行实验，在稀释过后，进行涂布平板，涂布梯度为10-5、10-6、10-7三种各200 μL。将恒温培养箱设置为30℃，培养3天后，对菌落周围观察是否有透明水解圈在平板培养基上长出。酶活力的高低可通过观察透明圈的大小进行初步确定 [11]。分离纯种需要取透明圈直径较大的菌种置于筛选平板上，进行划线分离最终直至纯种，然后斜面对其进行保存。

复筛：向装有50 mL的发酵培养基中加入已经进行纯化后的菌株，摇床参数设置为30℃、180 r/min，发酵3天，取发酵液进行酶活测定，记录。进行复筛培养后，得到的具有较高酶活力的生马铃薯淀粉菌株，并对其进一步分离纯化，同初筛过程一样进行斜面保存。