2 材料与方法
2.1 材料
阳性质粒DNA (含有NOS终止子),待测样品为水稻颗粒由老师提供。
2.2 试剂与耗材
DNA抽提试剂盒、定性PCR用Taq酶、dNTP、MgCl2、定量PCR用2x GoldStar TapMan Mixture(with ROX)、电泳用DNA ladder maker均由康为世纪公司提供。PCR Buffer由Thermo公司提供。PCR Buffer由Thermo公司提供。定性及定量PCR引物、探针均由上海捷瑞生物工程有限公司合成。
2.3 仪器设备
PCR扩增仪、电泳槽、实时荧光PCR扩增仪和电泳仪等电泳装置、凝胶成像系统。
2.4 方法
2.4.1 DNA的提取与纯化
操作步骤
1)将水稻颗粒使用美的搅拌机(MJ-BL25B2)粉碎成粉末状,称取 0. 2 g粉末装入液氮预冷的2mL离心管中,加入400μl Buffer GF14μlRNaseA(100mg/ml),涡旋振荡1分钟,使其充分裂解。
2)65℃孵育10分钟,期间涡旋混匀2~3次。
3)加入130μl Buffer GF2,混匀,冰上孵育5分钟。
4)将所得液体转移到已装入收集管的过滤柱中,14,000rpm离心2分钟,收集滤液。
水稻外源基因NOS终止子定性及定量检测分析(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_74631.html