枳椇子药材购自河北省安国药材市场，经中国医学科学院药用植物研究所杨峻山教授鉴定为鼠李科枳椇属北枳椇（Hovenia dulcis Thunb.）的干燥成熟种子。

2.1.2.2 仪器

紫外可见分光光度计（Varian公司）

BP211D型十万分之一电子天平（德国赛多利斯股份公司）

酶标仪（美国 Sigma 公司）

96孔板（美国costar公司）

2.1.2.3 试药

DPPH（Sigma 公司）

维生素C（Sigma公司）

维生素E（Sigma公司）

甲醇：分析纯（北京化工厂）

水（蒸馏水）

2.1.3 实验方法

2.1.3.1 DPPH溶液的配制

精密称取3.3×10-3g的DPPH试剂，用甲醇溶解定容至25mL容量瓶中，摇匀，作为储备液。从储备液中吸取20mL，转移至100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到DPPH溶液最终浓度为26.4µg/mL，备用。 文献综述

2.1.3.2 标准溶液最大吸收波长的确定

将紫外分光光度计的波长设定在200nm-800nm，测定3.1项中已配制好的DPPH溶液的吸收波长（图Fig.1-1），DPPH溶液在327nm和517nm处有最大吸收值，当加入枳椇子供试液，混匀后测定，发现两个值都有降低，但517nm处的吸收值降低较明显，所以选用517nm作为理想检测波长。

Fig.1-1   DPPH溶液的吸收波长

2.1.3.3 DPPH溶液标准曲线的的制作

分别配制3.4µg/mL、6.75µg/mL、13.5µg/mL、27.0µg/mL、54.0µg/mL5个浓度的DPPH溶液，以甲醇溶液作为空白，在酶标仪517nm处测定吸收值。以DPPH溶液的浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制标准曲线。线性方程为y=0.0019x-0.0003，R2=0.9992，图Fig.1-2，表明DPPH在3.4µg/mL～54.0µg/mL浓度范围内呈线性关系。

Fig.1-2    标准曲线

2.1.3.4 样品溶液的配制

2.1.3.4.1 标准品维生素C，维生素E溶液的配制

精密称取维生素C 0.0050g，移至25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精确吸取4mL至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得到浓度为0.016mg/mL的样品溶液，再分别准确量取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、5.0mL，置于10个10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的维生素C供试液。

精密称取维生素E 0.0190g，移至25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精确吸取4mL至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得到浓度为0.0608mg/mL的样品溶液，再分别精密吸取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、5.0mL，置于10个10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得到不同浓度的维生素E供试液。来~自^751论+文.网www.751com.cn/

2.1.3.4.2 枳椇子不同极性部位样品溶液的配制

称取干燥的枳椇子50g（40目），置于250mL圆底烧瓶中，以10倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，过滤合并滤液，减压回收乙醇，得稠膏7.5 g。稠膏用水分散，依次用石油醚（60-90）、氯仿、乙酸乙酯和水饱和正丁醇四种溶剂萃取，减压回收各层溶剂，得到石油醚层干膏，氯仿层干膏，乙酸乙酯层干膏，正丁醇层干膏，依次称取各层干膏5mg，移至50mL容量瓶中，加甲醇定容，作为样品母液，备用。