1.1 材料

转基因马铃薯淀粉

1.2 方法

1.2.1  转基因系淀粉葡萄糖当量值(DE值)的测定

标准曲线的制作：分别取0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的葡萄糖标准溶液(1 mg/mL)置于试管中，加入ddH2O至1.0 mL，分别加入1mL 的DNS试剂，在沸水浴中加热5min，冷却至室温。将空白管作为对照，用分光光度计在波长为540nm处测定样品的吸光值。标准曲线的回归方程为：y=1.4436x+0.0057，R2=0.9996。

淀粉DE值的测定方法：准确称取50 mg的转基因系淀粉，加入0.5M NaOH溶液5 mL，于90℃水浴锅中加热，一边加热一边搅拌，直至完全溶解。水浴结束后，将溶液冷却至室温，用1M 盐酸调节溶液pH至4.0左右，然后用10ml容量瓶定容。取0.5mL样品于离心管中，每个样品需要重复做三管，先加入异淀粉酶10μL，然后将淀粉样品放入40℃水浴锅中，加热2h，一边加热一边摇匀。最后将经异淀粉酶处理过的淀粉样品转移到做好标记的试管中，加入DNS试剂1mL 和去离子水490uL，其后操作参照标准曲线的制作方法。根据回归方程计算经异淀粉酶处理的淀粉样品中还原糖含量并计算淀粉的葡萄糖当量值(DE值)。文献综述

1.2.2 淀粉糊化性质的测定 

采用RVA-3D型的快速粘度分析仪，分析淀粉在加热过程中的糊化特性[2]。准确称取2 g的干淀粉样品，加入去离子水，将干淀粉配成浓度是8 g/100mL的淀粉乳。设定RVA分析程序为：10s内转速由960r/min下降至160r/min且保持恒定，50℃保温1min，在3.75min内以12℃/min从50℃上升至95℃，95℃保温2.5min，在3.75min内以12℃/min从95℃降至50℃，在50℃下保温2min。RVA的特征值主要包括峰值粘度(peak viscosity)、回生值(setback)、糊化温度(pasting temperature)等。每个样品需要重复测定3次。

1.2.3 淀粉热力学性质的测定 

马铃薯淀粉的DSC特征参数 [3-4] 用差示扫描量热法(Differential Scanning Calorimetry, DSC)进行测定。准确称取干淀粉样品2.5mg，置于铝制的样品盘中，加入去离子水7.5μL，然后称重并记录下淀粉样品的质量。将铝盘密封后放在4℃的冰箱中进行平衡，平衡时间为12h，在进行分析之前，取出铝盘置于室温下回温1h。以空铝盘作为对照，放入TGA/SDTA851e 热重/差热同步分析仪中进行测定。DSC 分析参数设定为：升温速率为10℃/min，加热温度范围为30-120℃，样品室N2流量为30mL/min。从DSC曲线上可计算出淀粉糊化的起始温度(onset temperature, To)、峰值温度(peak temperature, Tp)、终止温度(completion temperature, Tc)和淀粉糊化的焓变。每个样品需要重复测定3次。

1.2.4 淀粉糊性质的测定

1.2.4.1 淀粉糊透明度的测定

称取一定量的淀粉样品，加适量的蒸馏水配成质量分数是1%的淀粉乳，放置于烧杯中，置沸水浴中加热并搅拌30min，使之糊化并保持淀粉乳的体积不变,冷却至室温，把分 光光度计的波长调为620nm，以蒸馏水为空白对照，测定淀粉糊的透明度[5-6]。每个样品需要重复测定3次。

1.2.4.2 淀粉糊沉降体积的测定 

在具塞量筒中放入100ml配制好的质量分数为1%的淀粉乳，在室温下静置24h后记录 上层清液和下方沉淀物的体积。用下方沉淀体积占糊总体积的百分比来表示糊的凝沉性[6]。每个样品需要重复测定3次。来!自~751论-文|网www.751com.cn

1.2.4.3 淀粉糊析水率的测定 

在干淀粉中加入去离子水将淀粉样品配成浓度为6 g/100mL的淀粉乳后，将淀粉乳放于沸水浴中，加热糊化30min，一边加热一边搅拌。然后取出淀粉糊，冷却至室温，取0.5 mL淀粉糊于离心管中，称量并记录重量(M1)，然后将离心管置于-20℃的冰箱中冷冻24h。取出冷冻的淀粉糊，在室温下解冻，解冻后3 000 r离心10 min，把水吸干，称量并记录沉淀的重量(M2)。计算析水率(%)=(M1-M2)/M1×100。将离心后的淀粉糊再次置于-20℃的冰箱中冷冻24h，采用相同的方法测定淀粉糊经过两次冻融循环的析水率[6]。每个样品需要重复测定3次。 淀粉分支程度的增加对淀粉理化性质的影响(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_76327.html