2.6  脲酶的测定

2.6.1  实验试剂

    （1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。 

    （2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。 来!自~751论-文|网www.751com.cn

    （3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。 

    （4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。 

    （5）N的标准溶液：称0.4717g硫酸铵溶于水中，稀释至1L，得到标准溶液1ml含0.1mgn，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）

2.6.2  实验方法

    靛酚蓝比色法原理是以尿素为底物，经培养后根据脲酶酶促产物—氨（忽略消化过程中氨氮的消耗）在碱性介质中与苯酚，次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚。该生成数量与氮浓度成正比。传统靛酚蓝比色法原理是根据脲酶水解尿素时生成的氨态氮在强碱介质中和苯酚钠及次氯酸钠反应，形成蓝色靛酚，该生成数量与氮浓度成正比。因此，根据蓝靛酚比色结果表明土壤脲酶活性。