本文以不同浓度梯度Na2CO3溶液对花生幼苗进行胁迫处理，通过测定植株生长指标，叶片内MDA含量，SOD、POD、CAT活性及质膜透性率，研究碱胁迫对花生叶片膜脂过氧化作用的影响，分析探讨花生的抗逆耐受程度和对碱适应的生理生化机制，对理解植物在生长发育过程中活性氧产生的利弊以及进一步利用盐碱地种植花生提供理论依据。

2材料和方法

2.1供试材料

    花生（Arachis hypogaea Linn.)。

2.2材料处理

挑选颗粒饱满良好的花生种子置于24℃黑暗恒温箱中催芽，期间定时添加适量蒸馏水，以免水分蒸发种子被烘干。种子萌发后移至装有石英砂的培养瓶中固定根系，置于24℃，53%RH，4000Lx光照恒温培养箱中，蒸馏水培育一段时间。然后挑选长势均匀一致的植株进行无土栽培，定期浇灌Hoagland完全营养液50ml，当花生幼苗长至16cm左右时进行碱胁迫处理，实验设定7个不同浓度梯度的Na2CO3碱性盐溶液，分别为25 mmol/L、50 mmol/L、75 mmol/L、100 mmol/L、125 mmol/L、150mmol/L，175mmol/L每个浓度处理重复5次，每个培养瓶中培育3株花生幼苗，对照组浇完全营养液，每天定时定量更换处理液50ml，胁迫10天后测定相关指标，175mmol/L碱胁迫下花生幼苗致死，后期不做研究。

2.3测定指标及方法

实验中测试植株的生长生化指标，包括根重比、株高、根系干重以及五个生理生化指标：丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD），过氧化酶物（POD），过氧化氢酶（CAT）活性及质膜透性率（RPP）。

2.3.1 植株生长指标的测定方法

    植株生长指标的测定参照吴成龙的方法[5]。采用物理方法测定下列指标：根重比=根系鲜物质重/植株总鲜物重质；植株平均高度；根系干物质重。

2.3.2 丙二醛(MDA)含量的测定方法

MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸（TBA）显色法测定[6]，含量的计算采用双组分分光光度法来计算，最终结果以µmol/gFW表示。方法如下：

（1）每个梯度下分别取三支试管，一支为对照管，两支为测定管，对照光：3ml蒸馏水+3ml0.6％硫代巴比妥酸溶液；测定管：3mL提取液+3mL0.6％硫代巴比妥酸溶液 。（注：0.6％硫代巴比妥酸溶液用10％三氯乙酸溶解定容）

（2）各管沸水浴中煮沸15分钟，然后立即在冷水中冷却。

    （3）3000rmp离心15分钟，取上清液并量其体积，记录Vt，在450nm，532nm，600nm测定上清液Vs吸光度值。 

（4）根据公式计算MDA含量：                            

MDA的浓度：

                 (1-1)

MDA含量：

      (1-2)

2.3.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定方法

    SOD活性的大小采用氮蓝四唑（NBT）光还原法测定[7] ，以抑制NBT光化还原的50％所需酶量为1个SOD活力单位（U），最终结果以U/g FW表示。

    方法如下：

    （1）取10mL透明度好的试管4支，编号，按下表2-1加入各种溶液。（注意：其他溶液混匀后，再单独加入核黄素和酶液，总体积6.0ml。）

（2）各管溶液混匀后，1号管置于暗处，其他3管于4000lx日光下反应20min。要求各管受光强度一致。

    （3）反应完成后，用1号管（不光照）调零，测各管OD560值。根据公式计算结果：文献综述

                            （1-3）       碱胁迫对花生叶片膜脂过氧化的研究(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_77933.html