鉴于根癌农杆菌的菌体生长较为缓慢等原因，许多常规的方法都不能得到高效的转化率[12-16]。菌体变成感受态细胞之前一般要经过物理或化学方法，物理方法比如用电刺激细胞膜改变的方法法，化学方法主要有CaCl2法等方法。在物理或化学方法处理后使细胞膜的通透性发生改变，变成能够接纳外援DNA的细菌，这种状态即为感受态。电击转化的效率相对化学转化法高出很多，但是化学法的优势在于其比较能够稳定的转化出较多的感受态细胞，并且方法比较简单，而电击转化方法非常不稳定，并且比较繁琐。特别是化学法处理过后的菌株适用范围广，因此化学法被广泛应用于感受态细胞的制备。

目前，根癌农杆菌感受态细胞制备的主要方法CaCl2法，CaCl2法工程原理是利用化学分子将脂质双分子层的机构破坏使细胞膜的通透性改变，让外源DNA方便进入[17]。本实验以根癌农杆菌作为受体细胞，使用浓度，体积均相同的培养基，保存于条件也均相同，在其他条件不变的情况下，使用不同浓度的CaCl2溶液，实验观察不同浓度的CaCl2溶液对根癌农杆菌感受态细胞转化产生的不同结果，最后通过计数菌落数来算出转化子总数，再用特定的计算公式计算转化率。对转化率进行比较筛选，最后选择转化率最高的转化方案，以便以后能够快速的制备高产量的农杆菌感受态细胞[18-19]。来`自^751论*文-网www.751com.cn

2  材料与方法

2.1  材料 

  实验菌种：根癌农杆菌LBA4404

  试剂：CaCl2,MgCl2,甘油，利福平RIF（50 mg/L), 链霉素strep(100 mg/L）

  仪器：台式高速离心机，数显振荡培养箱，分光光度计，超低温冰箱

LB培养基：0.5%酵母浸出液（Yeast extract），1%蛋白胨 （Tryptone），1%NaCl，蒸馏水。