(2)电解质浸提:准确称取上述材料0.5g装入具塞烧杯中,加无离子水30mL,为使叶片完全浸入水中,可用真空泵抽气30min,于室温下浸泡4小时。
(3)电导率测定:先将各管浸泡液上下搅拌或摇匀,然后再测电导率值。 结果计算:
相对电导率(%)=(处理组电导率值/对照组电导率值)×100
1.3.5可溶性蛋白含量的测定
采用考马斯亮蓝G-250染色法测定[4],具体方法如下:
标准曲线的绘制:取6支试管,按表1 数据配制0~100μg/mL牛血清蛋白标准液各5mL。准确吸取所配的各管溶液0.1mL,分别放入10mL具塞试管中,加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂,盖塞,反转混合数次,放置2 min后,测定在595nm处的吸光度值。以蛋白质标准液浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
表1 配制0~100 μg/mL 血清白蛋白液
管号 1 2 3 4 5 6
1000μg/mL牛血清蛋白量/mL 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50
蒸馏水量/mL 5.00 4.90 4.80 4.70 4.60 4.50
蛋白质含量/μg 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00
样品测定:称取小麦幼苗0.5g,置于预冷的研钵中剪碎,加入5mL预冷的0.1mol/L(pH7.0)的磷酸缓冲液(分几次加入),石英砂少许,在冰浴下研磨成匀浆,4000 r/min离心10 min(2~4℃),所得上清液即为样品提取液。吸取样品提取液0.1mL,按上述方法与考马斯亮蓝G-250试剂反应,测得溶液在595nm处的吸光值,根据标准曲线查出相应的蛋白质浓度。结果计算: 不同小麦品种的抗旱性鉴定(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_8416.html