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固定化漆酶对农药毒死蜱的酶促降解(6)

时间:2017-06-19 20:44来源:毕业论文
电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A型 上海精宏实验设备有限公司 数显恒温水浴锅 HH-2 常州国华电器有限公司 pH计 pHS-25 科学仪器有限公司 超级恒温水浴 2004-21(


电热恒温鼓风干燥箱    DHG-9123A型    上海精宏实验设备有限公司
数显恒温水浴锅    HH-2    常州国华电器有限公司
pH计    pHS-25    科学仪器有限公司
超级恒温水浴    2004-21(501)    常州国华电器有限公司
紫外可见分光光度计    TU-1810    北京普析通用仪器有限公司
移液枪    100-1000μL    Eppendorf
移液枪    20-100μL    Finnpipette
2.1.2漆酶酶活的测定方法
    在3mL总反应体积中,含有2.5mmol/L愈创木酚(2-甲氧基酚)1mL,50mmol/L 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液和酶液共计2mL。
    测定时先将愈创木酚和适量缓冲溶液于30℃水浴中保温3min,保温结束后用移液枪添加适量的酶液。采用时间扫描的方式,时间间隔为30s,采样数为20,在465nm处测定吸光度。
定义每分钟氧化1umol愈创木酚所需酶量为一个酶活单位(U)。
酶活计算方法:式中:
     :吸光度的增量;
     :测定时总反应体积(mL);
     :酶液稀释倍数;
     :测定酶活时所取的酶液体积(mL);
     :反应时间的变化量;
     :消光系数( )
2.1.3  酶活影响因素
2.1.3.1 漆酶最适反应温度
     紫外可见分光光度计配备有超级恒温水浴,可在某一恒定温度下测定。利用超级恒温水浴使紫外可见分光光度计文持不同的温度,在不同的温度条件下测定漆酶酶活力。根据其酶活力的大小确定漆酶的最适反应温度。
2.1.3.2 漆酶热稳定性
将漆酶分装并置于不同温度下的恒温水浴中,于不同的时间点取样测定酶活。取出的样立即置于冰浴中,测定时在同一温度下进行根据酶活力的大小确定漆酶的热稳定性。
2.1.3.3 漆酶最适反应pH值
分别使用不同pH值的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为酶活测定时的缓冲溶液,测定同一份漆酶的酶活力。根据其酶活力的大小确定最适反应pH值。
2.1.3.4漆酶pH值稳定性
将酶液与不同pH值的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液按一定比例混合,置于同一温度的恒温水浴中,于不同的时间点取样测定酶活,根据酶活的大小确定其pH值稳定性。
2.1.3.5不同浓度的缓冲溶液对漆酶酶活的影响
将酶液与不同浓度的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液按一定比例混合,置于同一温度的恒温水浴中,于不同的时间点取样测定酶活,根据酶活的大小确定不同浓度的缓冲溶液对漆酶酶活的影响。 固定化漆酶对农药毒死蜱的酶促降解(6):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_9443.html
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