电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A型 上海精宏实验设备有限公司
数显恒温水浴锅 HH-2 常州国华电器有限公司
pH计 pHS-25 科学仪器有限公司
超级恒温水浴 2004-21(501) 常州国华电器有限公司
紫外可见分光光度计 TU-1810 北京普析通用仪器有限公司
移液枪 100-1000μL Eppendorf
移液枪 20-100μL Finnpipette
2.1.2漆酶酶活的测定方法
在3mL总反应体积中,含有2.5mmol/L愈创木酚(2-甲氧基酚)1mL,50mmol/L 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液和酶液共计2mL。
测定时先将愈创木酚和适量缓冲溶液于30℃水浴中保温3min,保温结束后用移液枪添加适量的酶液。采用时间扫描的方式,时间间隔为30s,采样数为20,在465nm处测定吸光度。
定义每分钟氧化1umol愈创木酚所需酶量为一个酶活单位(U)。
酶活计算方法:式中:
:吸光度的增量;
:测定时总反应体积(mL);
:酶液稀释倍数;
:测定酶活时所取的酶液体积(mL);
:反应时间的变化量;
:消光系数( )
2.1.3 酶活影响因素
2.1.3.1 漆酶最适反应温度
紫外可见分光光度计配备有超级恒温水浴,可在某一恒定温度下测定。利用超级恒温水浴使紫外可见分光光度计文持不同的温度,在不同的温度条件下测定漆酶酶活力。根据其酶活力的大小确定漆酶的最适反应温度。
2.1.3.2 漆酶热稳定性
将漆酶分装并置于不同温度下的恒温水浴中,于不同的时间点取样测定酶活。取出的样立即置于冰浴中,测定时在同一温度下进行根据酶活力的大小确定漆酶的热稳定性。
2.1.3.3 漆酶最适反应pH值
分别使用不同pH值的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为酶活测定时的缓冲溶液,测定同一份漆酶的酶活力。根据其酶活力的大小确定最适反应pH值。
2.1.3.4漆酶pH值稳定性
将酶液与不同pH值的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液按一定比例混合,置于同一温度的恒温水浴中,于不同的时间点取样测定酶活,根据酶活的大小确定其pH值稳定性。
2.1.3.5不同浓度的缓冲溶液对漆酶酶活的影响
将酶液与不同浓度的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液按一定比例混合,置于同一温度的恒温水浴中,于不同的时间点取样测定酶活,根据酶活的大小确定不同浓度的缓冲溶液对漆酶酶活的影响。 固定化漆酶对农药毒死蜱的酶促降解(6):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_9443.html