1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验材料   

表1 实验试剂

名称 规格 生产厂家

蛋白胨 分析纯AR 北京奥博星生物技术责任有限公司

酵母提取物 生化试剂BR 北京奥博星生物技术责任有限公司

琼脂粉    生化试剂BR 北京奥博星生物技术责任有限公司

氯化钠 分析纯AR                上海凌峰化学试剂有限公司

磷酸二氢钾 分析纯AR                        上海凌峰化学试剂有限公司

磷酸氢二钾 分析纯AR 上海凌峰化学式剂有限公司

FAD 分析纯AR 大连宝生物工程

盐酸甲醇 自制 13%的盐酸甲醇

盐酸 分析纯AR 上海凌峰化学试剂有限公司

甲醇 分析纯AR 上海凌峰化学试剂有限公司

甘油(glycerol) 分析纯AR              中国惠兴生化试剂有限公司

卡那霉素 分析纯AR 大连宝生物工程

IPTG 分析纯AR 大连宝生物工程

异丙醇 分析纯AR 上海百灵威

正己烷 分析纯AR 上海百灵威

红花籽油 LA>70% 中粮塔原红花有限公司

t10,c12-CLA >90% Sigma-Aldrich

Tris base 分析纯AR BIOSHARP

卡那霉素（Kan） 分析纯AR BIOSHARP

感受态细胞：BL21(DE3)等从gene-ray公司购买。

LB液体培养基：酵母提取物 5g/L，蛋白胨 10g/L，NaCl 10g/L；LB固体培养基：琼脂1.5%g/L，蛋白胨 10g/L，NaCl 10g/L，酵母提取物 5g/L；制备含抗性的培养基，则加入1‰的Kan或者Amp，灭菌后加热，在超净工作台内进行倒平板，每个平板大概10ml。来~自^751论+文.网www.751com.cn/

实验室自制盐酸甲醇

实验前，将实验中使用的三口瓶、三口瓶塞、橡皮软管、试剂瓶及氯化钠充分清洗并放在恒温干燥箱内充分干燥。干燥后将VmL的无水甲醇迅速加入到试剂瓶内，并提前加入足量氯化钠加入到反应瓶内，用橡皮软管将其与三口瓶连接，试剂瓶放在天平上，将三口瓶固定在水浴锅上方且瓶身1/3沉没在水中，水浴锅加热至70℃。，迅速加入适量的浓盐酸反应瓶内，观察试剂瓶和天平的变化，反复几次，待重量增加1/9Vg时停止反应。将制备好的盐酸-甲醇放在4℃冰箱内保存，用以脂肪酸的甲酯化。 红花籽油为底物生物合成CLA的研究(3):http://www.751com.cn/shiping/lunwen_75450.html