YC 68.80 18.20 13.00 8.60 0.58 0.101 755
1.2试剂与仪器
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1.3 培养基
无机盐MSM培养基:氯化钠:0.5 g,磷酸氢二钾:0.75 g,磷酸二氢钾0.25 g, 无水硫酸镁:0.04878g,硝酸铵:0.5 g,用去离子水定容至500 mL,pH值为7.5,120℃高温灭菌备用。
MP培养基为MSM培养基中添加除草剂扑灭津至一定浓度,120℃高温灭菌备用。
固体培养基于无机盐培养基中加入0.5 %的琼脂,120℃高温灭菌备用。
1.4 菌株的筛选、培养和降解动力学
1.4.1 降解菌富集液的制备
取采集回来的南京3种不同土壤1.0 g,分别添加于50 mL的MP培养基中,每个样品设置三个平行,培养基的浓度为10 mg L-1,放于恒温振荡器中,35℃,180 r min-1 振荡培养。之后每7天进行一次转接,及以5 % 的接种量接到新配制的MP培养基中,每7天提高一次培养基中扑灭津的浓度直至60 mg L-1,如此培养1-2个月,同时对接种了不同土壤的培养基中扑灭津的浓度进行测定,对扑灭津有降解效果(降解率> 50 %)的样品被挑选出来,监测农药降解行为以及菌的生长情况。
1.4.2 无机盐MSM培养基中扑灭津检测方法的建立
扑灭津在无机盐MSM培养基中的前处理方法的建立:量取50 mL配置好的MSM培养基,向其中加入5、50、300 μL的扑灭津标准溶液(10 g L-1),振荡均匀,使其在培养基中的浓度分别为1、10和60 mg L-1,每个样品设置三个平行。将配置好的加标后的培养基溶液用石油醚进行液液萃取,每次使用石油醚15 mL,取上层有机相,重复此操作四次,有机相合并后在40 ℃旋转浓缩至干。用色谱甲醇10 mL 定容,超声30 s后用针管吸取1mL过0.45 μm滤膜,待进高效液相色谱测定(高浓度组需要色谱甲醇逐级稀释后进样)。高效液相色谱检测条件:色谱柱:C18反相柱(Thermo, 250 mm×4.6 mm i.d.),进样温度:25 ℃,流动相:甲醇:水 = 75:25(V/V),流动相流速:0.6 mL min-1,UV紫外检测器检测,检测波长:230 nm,进样量:20 μL。 三嗪类除草剂降解菌的分离及降解行为研究(3):http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_19407.html