2.2 实验方法

参照24h换水式毒性试验方法进行试验。

先进行预备试验，估算乙醇试验24h的最低全致死浓度(100％死亡)和96h最大全部存活浓度范围，确定正式试验的浓度区间。然后在该范围内设4各浓度组，浓度的设定采用梯度间距法和1个对照组，每组设2个平行试验，取其平均值，其浓度梯度为12ml/L、16 ml/L、20 ml/L、24 ml/L。试验容器规格为58cm×37cm×35cm的水簇箱，水温11.5±0.3℃，pH值7.1±0.2。每个玻璃缸中给予不同体积的乙醇溶液，随机放入8尾虾，每24h换试验溶液1次。及时捞出死虾和废物。

试验开始后，前6h每隔1h连续观察，然后每隔3h观察记录试验虾的活动。连续观察12h，发现死亡个体及时捞出。克氏原螯虾的死亡以其身体完全僵硬不动，从药液中捞出 5min 后仍不动为标准。观察内容包括试验虾的行为异常、体色变化,记录克氏原螯虾的药物中毒症状、死亡症状等，记录12h、24h、36h、48h试验虾的死亡数和死亡率。

2.3 数据处理

根据乙醇对克氏原螯虾的急性毒性试验结果，利用Excel 2003进行整理和分析，根据克氏原螯虾的死亡数及死亡时间，分别计算12h、24h、36h、48h的半致死浓度，计算公式及具体计算步骤如下：

LC50=C1+[(P1-50%)/(P1-P2)]×(C2-C1)                              ①

式中：C1、C2分别为存活率接近 50%的低端浓度和高端浓度，P1、P2分别为相应的存活率[7]。