2.3.2样品处理

(1)取样

每3天各取6种发酵样品约200g于铝箔纸中，放入冰箱冷冻不少于24小时后利用冷冻干燥机进行干燥。

(2)加提取剂

称取干燥的发酵泥样(磨细过1 mm筛)各5g于500 mL锥形瓶中(每种泥样设置2个平行样品)，加入纯二氯甲烷80 mL。

(3)超声波提取来!自~751论-文|网www.751com.cn

将上述锥形瓶中的样品用超声波清洗机震荡提取90 min，以萃取泥样中的有机物。

(4)过滤

另取用于旋转蒸发的烧瓶，对应上述锥形瓶贴好标签。将萃取出的上清液经长颈漏斗过滤到12个烧瓶中，同时用少量提取剂冲洗两遍装过上清液的锥形瓶，冲洗液一并倒入相应的漏斗中以减少误差。

(5)蒸发浓缩

用旋转蒸发仪将过滤后的提取液蒸发浓缩至2 mL左右,浓缩液转移至4 mL样品瓶中，并用提取剂清洗2到3遍旋转浓缩后的烧瓶，清洗液一同转移至4 mL样品瓶中待用。

(6)过柱子净化

称取干燥过的柱层层析硅胶7g溶于二氯甲烷中填柱，柱体上层撒3.54g无水硫酸钠用于除去有机溶液中的水份。将提取液加入硅胶柱中流至尽干后，依次加入50mL二氯甲烷，50mL二氯甲烷与正己烷1:1混合液，50mL正己烷洗脱，收洗脱液。

(7)再次旋蒸浓缩

用旋转蒸发仪将收集液蒸发浓缩至2 mL左右,浓缩液转移至4 mL样品瓶中，并用提取剂清洗2到3遍浓缩后的烧瓶，清洗液一同转移至4 mL样品瓶中待用。

(8)氮吹定容

用氮吹仪吹干样品后移取2 mL甲醇定容，定容液经有机系针头过滤后装瓶，待上机检测。