N-琥珀酰壳聚糖的荧光素标记反应研究

摘要：琥珀酰壳聚糖是一种低毒的聚阳离子改性载体，具有广阔的应用前景。本论文探索了异硫氰酸荧光素标记琥珀酰壳聚糖的反应条件，通过对反应体系的pH和加料速度的控制，将标记率从1.33%提高到1.94%。随后进行 A549、H460和MCF-7 三种肿瘤细胞对荧光标记琥珀酰壳聚糖摄取率的测定，研究琥珀酰壳聚糖对肿瘤细胞的亲和性。将上述三种细胞分别与不同浓度的FITC-琥珀酰壳聚糖进行共孵育，通过测定细胞内荧光强度来确定摄取率，结果显示，H460对FITC-琥珀酰壳聚糖的亲和性最强。19394
关键词肿瘤细胞荧光标记   琥珀酰壳聚糖摄取率
Title   Study of FITC labeled N-Succinyl-Chitosan reaction
Abstract N-Succinyl chitosan is a low toxicity, polycation-based carrier which has wider application prospect. This paper mainly studied the reaction conditions of fluorescein isothiocyanate labeled N-succinyl-chitosan for improving the labeling rate of fluorescent N-succinyl chitosan. By controlling of pH and the feed rate of the reaction system, the labeling rate increased from 1.33% to 1.94%. Then, the uptake rate of A549, H460 and MCF-7 tumor cell against N-succinyl-chitosan was determined. By culturing the three kinds of cell above, the concentration of FITC-succinyl chitosan was differed, and the uptake rate was determined by measuring the fluorescence intensity, the result showed that H460 has strongest affinity on FITC-succinyl chitosan.
Keywords    Tumor cells Fluorescently labeled Succinyl chitosan Uptake rate
目录
1、引言2
1.1壳聚糖作为药物载体的剂型-2
1.11壳聚糖纳米粒-2
1.12壳聚糖膜-2
1.13壳聚糖片剂2
1.14壳聚糖微胶囊-2
1.15壳聚糖微球3
1.2壳聚糖作为药物载体的应用-3
1.21壳聚糖作为消化道药物靶向载体-3
1.22壳聚糖作为抗肿瘤药物载体3
1.23基因运载工具-3
1.31 壳聚糖基因载体的大小及相关条件-4
1.32壳聚糖/DNA 载体的稳定性4
1.33壳聚糖/DNA 载体的转染能力-5
1.34壳聚糖及其衍生物转染效率-5
1.4 研究课题的提出和内容-6
1.4.1 研究课题的提出-6
1.4.2 研究内容-6
2 实验材料与方法6
2.1 材料与试剂-6
2.1.1 试剂-6
2.1.2 仪器-7
2.1.3 常用试剂配制-7
2.2   实验方法-7
2.2.1 琥珀酰壳聚糖的合成-8
2.2.2 FITC-琥珀酰壳聚糖的合成-8
2.2.3 荧光标记率测定-9
2.2.4 细胞培养-9
2.2.5 细胞冻存-9
2.2.6 BCA法测定蛋白浓度10
2.2.6.1蛋白标准曲线绘制10
2.2.7 FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定11
3 结果与讨论11
3.1 FITC-琥珀酰壳聚糖荧光标记率11
3.2 BCA法测定蛋白浓度12
3.3 A549细胞FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定13
3.4 H460细胞FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定15
3.5 MCF-7细胞FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定27
结论-29
展望-20
致谢-20
参考文献-21
1、引言
壳聚糖是一种资源丰富的新型天然高分子有机化合物，是一种物理、化学性质优良的多糖有机化合物，具有低毒性、易于吸收、组织相容性好、生物学活性多样等优良特点，是一种良好的天然药物释放载体【1】。下面介绍壳聚糖在作为药物缓慢释放载体时的生物学特点、类型及其在临床上的实际应用，其中作为基因运载载体的应用是近年来国内外研究的重点和热点。同时还展望了壳聚糖作为药物载体的良好发展前景。
1.1壳聚糖作为药物载体的剂型
1.11 壳聚糖纳米粒
纳米级聚合物作为药物传递载体和控释的载体，由于其微小的体积，高效的药物利用率和合理的体内分布，能够有效的通过组织上皮，从而有效地对药物进行靶向输送和控制释放，从而成为包埋多肽、核酸、疫苗、蛋白质等具有生物活性的大分子药物理想载体【2】 N-琥珀酰壳聚糖的荧光素标记反应研究:http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_10732.html