重组大肠杆菌JM109 OD600nm    
大肠杆菌JM109 OD600nm    
0.014
图4  重组菌和对照菌的生长曲线

由图4可知，培养4h后，重组大肠杆菌和对照大肠杆菌JM109的生长均处于对数生长期，8h以后基本处于稳定期，培养到14h时，两菌株的OD660  均无显著差异（P＞0.05）。该结果表明，转入的磷酸盐吸附蛋白基因片段对于菌的生长没有造成负担.

3.2磷酸盐标准曲线
根据实验方法测得磷酸盐标准溶液及吸光值见表3。根据测得数据绘制标准曲线，见图5。
      表3   磷酸盐标准溶液吸光度测定
试管号    1    2    3    4    5    6
PO43-含量mg/ml    0    0.04    0.08    0.40    0.80    1.20
OD660nm    0.003    0.012    0.031    0.151    0.301    0.474
图5  磷酸盐标准曲线
3.3 磷酸盐吸附能力分析
IPTG诱导重组大肠杆菌后磷酸盐吸附量及对照大肠杆菌JM109磷酸盐吸附量见表4和表5。由图6可见，在IPTG处理后，对照组大肠杆菌JM109培养液中磷酸盐浓度一直文持在较高的水平，但重组菌大肠杆菌培养液中磷酸盐浓度则显著下贱，统计学分析表明，两菌株在培养4h，培养液中磷酸盐浓度无显著差异（P＞0.05）；但在培养8h后，重组菌磷浓度显著低于对照组（P＜0.05）；培养10h后，重组菌培养液中磷酸盐浓度下降到0.39 mg／mL，约为对照菌的81%。
     表4  重组菌大肠杆菌磷酸盐吸附能力测定
时间h    0    1    2    4    6    8    10
吸光度OD660nm    0.194    0.194    0.190    0.186    0.178    0.159    0.151
PO43-含量mg/ml    0.50    0.50    0.49    0.48    0.46    0.41    0.39
表5  对照组大肠杆菌JM109磷酸盐吸附能力测定
时间h    0    1    2    4    6    8    10
吸光度OD660nm    0.194    0.194    0.194    0.194    0.190    0.186    0.186
PO43-含量mg/ml    0.50    0.50    0.50    0.50    0.49    0.48    0.48
            图6  IPTG处理后重组大肠杆菌和对照菌培养液中磷酸浓度的比较
4.结论
从phos基因的PCR扩增结果发现（图1），目的基因phos为972bp，条带清晰，但有非特异性扩增条带出现。这可能是PCR扩增过程中设置的退火温度较低导致。
克隆大肠杆菌磷酸盐吸附蛋白基因，转入大肠杆菌JM109中，构建重组菌，该基因能在重组菌中高效表达。
重组菌生长优于对照菌。在IPTG的诱导后，重组菌能大量表达磷酸盐吸附蛋白，磷酸盐浓度约为对照菌的磷酸盐浓度的0.81倍，可见有较好的除磷效果。
在大肠杆菌重组菌中，10 h内KH2PO4吸附量达到0.11 mg／mL，对照大肠杆菌JMl09则没有明显磷酸盐吸附能力，可见重组菌显示出高磷酸盐吸附能力。受体菌的吸附能力较低是因为磷酸盐在细菌细胞内浓度有限，一旦达到一定的浓度细菌本身不再从外界环境中转运磷酸盐，因此，对降低环境中磷酸盐含量的能力有限。 利用冰晶核蛋白构建磷酸盐吸附蛋白大肠杆菌细胞表面展示体系(6):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_1247.html