本次研究主要是想要从湖羊成年羊组织（背肌、腿肌、心、肝 脾、肾、肺、）进行实验，利用荧光实时定量PCR来测定在湖羊成年羊各个组织中miRNA-432表达的差异性，为后续的在提高湖羊生产性能或者其基因改造方面提供实验依据和理论基础。

2材料与方法

2.1材料

2.1.1样品湖羊组织的材料来源

样本来源为江苏省某湖羊养殖场，由湖羊成年羊身体上分离的组织，包括(背肌、腿肌、心、肝、脾、肾、肺、），!751·文~论^文'网www.751com.cn清洗后迅速放入液氮瓶中低温保存以防温度过高样品变质，带回实验室后在超低温冰箱中-80℃的温度下保存。

2.1.2实验设备

表2-1实验仪器

Table 2-1  Experimental apparatus and equipment

仪器名称 型号 生产厂家或地址

紫外分光光度计 NANODROP  2000C GBC公司

荧光定量PCR Stepone software 美国

Eppendorf移液器系列 1000l，200l，100l，10l，2.5l 德国

高速冷冻离心机 Biofug Stratos 德国

超低温立式冰柜 MDF-382E 日本三洋

超净工作台 SW-CJ-1B 苏州

三孔电热恒温水槽 DK-8D 上海

制冰机 FM70A 中国格兰特

电子天平 BP211D 德国Sartorious

漩涡混匀器 Vortex-Genie 2 美国科技公司

掌上离心机 WTL 中国

2.1.3实验试剂

普通试剂：无水乙醇，DEPC-超纯水，异丙醇，Tab酶，NaCl，液氮，SYBR Green染料，

RNAiso  Plus（裂解液），RNase-free水，氯仿，PCR定量试剂盒

    反转录试剂盒：① RT Prime mix  ② 5*prime suipt Buffer2  ③ RNase Free dH2O  ④ 5*gDNA Eraser Buffer  ⑤ gDNA Eraser  ⑥ prime suipt RT Enzyne mirl