本氏烟(Nicotiana benthamiana, Nb)是一种优质的用于植物病毒学研究的模式植物。大多数的植物病毒极易感染于本氏烟,而且本氏烟也是其它病原微生物如细菌、卵菌、真菌等的宿主。另外,本氏烟生长周期短,植株较小易于栽培,而且具有良好的遗传转化和再生能力。鉴于此,本氏烟成为研究双生病毒复制蛋白的结构和功能的生物材料。
第一章 材料与方法
1. 实验材料与试剂
1.1 实验材料
1.1.1 菌株与质粒
感受态细胞DH5和Trans-T1购自全式金公司。pEGFP质粒、农杆菌菌株EHA105及克隆载体pCAMBIA2300: FT:EGFP为实验室保存。ACMV (DNA A 质粒为pBIN1.3A,AMP+抗性,DNA-B 质粒为pBIN2B,Tet+)病毒质粒由杭州师范大学植物RNA信号传导中心主任洪益国教授提供。
1.1.2 病毒
非洲木薯花叶病毒(African cassava mosaec virus)即ACMV病毒
1.1.3 受体植物
本氏烟(Nicotiana benthamiana)
1.1.4 .植物生长条件
实验植物生长在无虫恒温(25℃)温室中,并给予16 h光照/8 h黑暗。
1.2 酶及化学试剂
实验室所用的各种限制性内切酶、T4 DNA连接酶等均购自NEB公司, Taq plus DNA聚合酶及Prime Star(PS)高保真聚合酶,购自TAKARA公司,PCR产物回收试剂盒和小量质粒提取试剂盒购自Qiagen公司,PCR引物合成、DNA片段测序均由上海英俊生物科技有限公司完成。
1.3 实验仪器
小型离心机(Eppendorf centrifuge 5424);PCR仪(BIO-RAD C1000 Thermal cycler);凝胶成像系统(BIO-RAD GelDoc XR+Gel Imaging System);细菌培养箱(美国Thermal公司);超净工作台(苏净)
植物双生病毒复制蛋白构建外源基因特异表达系统的研究(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_48630.html