参考文献 14

致谢 16

微生物固体发酵生产纤维素酶  引言

纤维素酶不是单一的一种酶，是好多种酶系在一块起协同作用，是把纤维素分解成为葡萄糖的一类酶的总称。纤维素在地球上的资源比较富足，如果通过降解，就可以转化为很多有用的东西为我们人类所用，这对于解决全球食物难题和能源问题有非常大的意义。随着科技的发展，我们可以利用的资源越来越少，而环境的污染日益加重，寻找减少环境污染的有效途径显得越来越紧迫,源^自#751^文/论`文]网[www.751com.cn。由于纤维素的生产成本过高，因此，寻找高产纤维素酶的途径，提高纤维素酶的活力对一些能源的利用具有深远的意义。此次实验就是利用微生物发酵产酶的功能，通过固体培养基发酵生产纤维素酶。

1. 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验试材

芽孢杆菌：从土壤中筛选的芽孢杆菌SC1。

1.1.2 主要培养基

活化芽孢杆菌用的LB培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，pH 7.4，水1000 mL；

产酶培养基1号：小麦麸皮5g，玉米粉5g，羧甲基纤维素钠0.2g，硫酸铵0.1g，磷酸氢二钾0.005g，尿素0.2g，碳酸钙0.05g；

产酶培养基2号：小麦麸皮3g，玉米粉7g，硫酸铵0.05g，磷酸氢二钾0.01g，尿素0.1g，碳酸钙0.07g，硫酸镁0.02g；

产酶培养基3号：小麦麸皮7g，玉米粉3g，羧甲基纤维素钠0.1g，硫酸铵0.15g，磷酸氢二钾0.02g，尿素0.05g，碳酸钙0.02g，硫酸镁0.01g。

筛选培养基：羧甲基纤维素钠20g，磷酸氢二钠2.5g，磷酸二氢钾1.5g，蛋白胨2.5g，酵母膏0.5g，琼脂20g，水1000mL，pH：7.0~7.2。

上述所有培养基的灭菌条件统一为：121 ℃，0.1 MPa，15 min。

1.1.3 试剂

（1）DNS试剂：准确称取3，5-二硝基水杨酸10 g，溶于600 mL水中，然后加入氢氧化钠10 g，在水浴中用玻璃棒搅拌溶解，水浴温度是50 ℃，然后再按顺序加入酒石酸钾钠200 g，苯酚2 g，最后加入无水亚硫酸钠5 g，等到完全溶后，放置恢复到室温。然后加入蒸馏水，接着用用1000 mL的容量瓶定容，最后又经过滤。最后把它保存在棕色试剂瓶中，放在暗处1天后再使用。

（2）葡萄糖标准贮备液：称取葡萄糖1 g后加入蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌溶解,源^自#751^文/论`文]网[www.751com.cn，然后用100 mL的容量瓶定容。

（3）羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na）：用天平准确称取羧甲基纤维素钠0.80g，然后用量筒量取乙酸—乙酸钠缓冲液90mL，然后倒入烧杯中，在磁力搅拌器上将称取的羧甲基纤维素钠缓慢的加入烧杯中，目的是为了是让羧甲基纤维素钠充分溶解。最后定容是用乙酸—乙酸钠缓冲液，定容到100mL。将配好的羧甲基纤维素钠溶液在4度冰箱避光保存，有效期为3天。

（4）pH为5.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液：准确称取磷酸氢二钠7.164 g，用100mL的容量瓶加入蒸馏水定容，即为0.2 mol/L的A液。准确称取柠檬酸2.101 g，加水定容至100 mL，即为0.1 mol/L的B液。然后取A液51.5 mL，B液48.5 mL混合，即为所需缓冲液。