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紫薯ANR基因序列多样性分析(2)

时间:2020-06-17 20:10来源:毕业论文
1.2 方法1.2.1 基因组 DNA 的提取采用CTAB 法提取叶片总 DNA[9]:1.取出材料置于冰上,用液氮研磨成细粉末再放置于 50ml 离心管中2.加入 65℃预设的2CTAB(5ml/g 材料


1.2 方法1.2.1 基因组 DNA 的提取采用CTAB 法提取叶片总 DNA[9]:1.取出材料置于冰上,用液氮研磨成细粉末再放置于 50ml 离心管中2.加入 65℃预设的2×CTAB(5ml/g 材料),并放于 65℃水浴中45min 以上,间或搅拌3.离心(13000×25min,室温,用三氯甲烷:异戊醇=24:1平衡)4.将上清倒入干净的 10ml 离心管,加入等体积的三氯甲烷:异戊醇(24:1)混匀,轻摇30min 以上,再次离心(13000×25min,室温)5.吸出上清液,重复第四步6.将上清液吸到 10ml 离心管,加入 2/5体积在-20℃预冷过的异丙醇,接着用钢针缓慢搅动致使DNA 沉淀,再将此 DNA移到 1.5ml 干净离心管中7.用 10mMNaAc 和 75%乙醇洗涤2-3次8.离心(10000×5min)9.将 95%乙醇加入上述离心管中,再离心(10000×5min),然后清洗10.将离心管中的乙醇倒去,真空抽干,将离心管中物质荣誉 20ulRNase 且ph=8.0的 TE中,在 37℃的环境下消化RNA1h。11.将提取出来的 DNA 放入-20℃的冰箱中备用12.从冰箱中取出相应 DNA,每种提取 0.5ul稀释到100ul 体积,用NanoDrop2000测定其浓度

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