2 主要材料

2.1 主要试剂

1) 对二甲苯：上海生工生物

2) 绒促性素（HCG）：宁波第二激素厂

3) 3-氨基-苯甲酸乙酯（MS222）：意大利Sigma-Aldrich公司

4) 10X Steinberg’s Stock：实验室配置

5) 葡萄糖醛酸内酯：阿拉丁

2.2 主要仪器

1) 连续变倍体视显微镜：苏州欧米特光电科技有限公司

2) 恒温培养箱：福意联，北京福意电器有限公司  

3) 爪蟾视觉逃避行为密闭装置（自组装）

2.3 试剂的准备

1) 10X Steinberg’s Stock：119g 缓冲液，34g盐，2.06g硫酸美，o.8g硝酸铵钙，0.5g氯化钾，1升水调制pH至7.5

2) 3-氨基-苯甲酸乙酯：500mL Steinberg’s Solution和0.1g 3-氨基-苯甲酸乙酯粉混匀，调节pH至7.4。

3 主要方法

3.1 爪蟾的饲养

成年非洲爪蟾购自美国NASCO公司，雌雄成年爪蟾饲养在去氯自来水的爪蟾养殖系统内，水温大约在20℃左右[10]，明暗光照周期为12h:12h，每周喂1次猪心和1次合成饲料。

3.2 PX的制备

PX的浓度为0.861g/ml,稀释1000倍后，在通风厨内用移液枪吸取400ul的PX母液放入装有399.6ml双蒸水的棕色瓶中。配制成400ml的溶液备用。

3.2.1蝌蚪培养

在成年雌雄蛙体内分别注射HCG，雌性爪蟾注射1000单位HCG,雄性爪蟾注射500单位HCG，放在一个水箱内进行配对。受精的卵母细胞孵化后第五天开始选择活动状态良好的蝌蚪80只作为实验材料备用。

3.2.2 PX溶液对蝌蚪的培养

随机分成4组，设置实验组和对照组。其中1为对照组，2、3、4为实验组，各组20只蝌蚪。实验用挑选的体表无损、活力良好且尾巴未受损的20只健康的蝌蚪放置                                                                  于对二甲苯浓度分别为0、1、2、2.5mM的环境下培养7天, 观察蝌蚪生长状况：包括每组蝌蚪畸变数目、每组存活数目和死亡数目以及行为学数据统计，以探讨不同浓度对二甲苯对蝌蚪生长发育的影响