2.1.4  微囊藻毒素 MC-LR 的提纯与富集  ·   10 

2.1.5  MC--LR的分析检测  ·   10 

2.2  结果和讨论        10 

3  藻毒素的酶降解   ·  13 

3.1  MNP 的生产与活性测定     ·   13 

3.1.1  白腐真菌菌株   ·   13 

3.1.2  主要试剂和仪器      13 

3.1.3  PDA培养基   ·   14 

3.1.4  Kirk培养基   ·   14 

3.1.5  白腐真菌活化   ·   15 

3.1.6  液体培养    ·   15 

3.1.7  酶活测定    ·   15 

3.1.8  H2O2溶液含量的标定   ·   16 

3.2  漆酶降解藻毒素        17 

3.2.1  漆酶的来源       17 

3.2.2  漆酶的活性测定      17 

3.2.3  漆酶对藻毒素降解实验   ·   18 

3.3  结果与讨论        18 

3.3.1  MnP 的制备   ·   18 

3.3.2  漆酶对藻毒素的降解      22 

3.4结论与建议      ·   23 

致  谢     24 

参考文献    ·  25 
1前言 1.1微囊藻毒素基本介绍 水藻类中，毒性最强、污染最广、最严重的是蓝藻门。目前已肯定的有毒藻类有铜绿微囊藻、水华鱼腥藻、水华束丝藻、阿氏颤藻、泡沫节球藻及念珠藻等。这些藻类产毒受外界条件影响，若外界条件发生变化，则一种藻可能会产生几种毒素。藻毒素是一种肝毒素，使哺乳动物肝脏发生病变，是一种强烈致癌剂[1]。上世纪60年代，在Bishop 首次分离出藻毒素后，有许多藻毒素与肝脏病变相关的报道。美国、芬兰、澳大利亚等 l0 多个国家都曾先后报道其湖泊、河流、水库中发生蓝藻水华，并从中成功分离出有毒的藻株[2]。在夏秋季节，我国的太湖、滇池等水源地及各种湖泊中，爆发蓝藻水华的情况很严重，部分地区每年长达7-8 个月源]自{751·~论\文}网·www.751com.cn/ ，并且 80%左右的天然水体蓝藻水华会产生有毒的藻毒素[3]。藻毒素主要有三种：肝毒素、神经毒素和脂多糖毒素，其中毒性最强的是肝毒素。微囊藻毒素出现在受蓝藻水华污染的水体中，它是水体中毒性最强，出现频率最高，危害最严重的一种肝毒素。微囊藻毒素为有活性的单环七肽化合物，大部分由在淡水中生长的藻类产生。微囊藻毒素（Microcystin, MC）为细胞内合成毒素，当细胞破裂时，其释放到外界，对外界造成严重的污染。 MC 是一种单环七肽物质：D-丙氨酸-L-X-赤-β-甲基-D-异谷氨酸-Mdha。其中Mdha是一种特殊氨基酸；Adda为3-氨基-9-甲氧基-2，6，8-三甲基-10-苯-4，6-二烯酸；X和Y为两种可变 L氨基酸[4]，对哺乳动物的肝脏会产生严重伤害。此外，由于两种自由的氨基酸会随机排列组合，故导致 MC 存在多种同分异构体。在各种异构体中，出现频率最高、含量最多的分别是 MC-LR，MC-RR，MC-YR这3种微囊藻毒素。目前为止研究的 MC 类型多数是 MC-LR 和MC-RR。MC 的毒性和其结构相关，Adda 基团是决定 MC 毒性的重要基团。
大量数据证明，MC-LR 的毒性最强烈， 对哺乳动物肝脏的伤害最严重，半致死量为 35-100µg/kg，MC-YR 次之，MC-RR最弱[5]。MC 主要以肝脏为靶器官[6-7]，动物经灌喂或腹腔注射后，其体内细胞内部的蛋白磷酸化平衡受到影响，酶的生物活性发生改变，引起肝脏病变。微囊藻毒素中毒的症状主要表现为身体虚弱、呼吸沉重、皮肤变白、呕吐、腹泻、嗜睡等。Mcelhiney等[8]发现 MC-LR 对茄属植物的生长和豆类植物根的生长有比较大的影响。 MC 单环结构的分子量为 900-1100，是水体中最常见的一种蓝绿藻毒素。一般为环型结构。其中，Adda（3-氨基-9-甲氧基-2,6,8-三甲基-10-苯基-4,6-二烯酸）是一种特殊的氨基酸，是藻毒素活性表达的重要基团；X和Y在不同的微囊藻毒素变体中代表不同的氨基酸，并以此为该毒素命名[9]。 微囊藻毒素生物降解研究(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_64984.html