2  材料与方法

2.1 植物材料

徐紫薯3号的叶片。

2.2 试剂

液氮、95%乙醇、异丙醇、Regular Agarose G-10、75%乙醇、10mM NaAC、95%乙醇、PH8.0的TE溶液、酚、氯仿、1M Tris-HCl溶液、AP1 Primer（100 pmol/μl）、AP2 Primer（100 pmol/μl）、AP3 Primer（100 pmol/μl）、AP4 Primer（100 pmol/μl） 、Control Template（100 ng/μl）、 Control Specific Primer SP1（10 pmol/μl）、Control Specific Primer SP2（10 pmol/μl）、Control Specific Primer SP3（10 pmol/μl）、TaKaRa LA Taq （5 U/μl）、10×LA PCR Buffer II（Mg2+ plus）、dNTP Mixture（2.5 mM each）、2xCTAB溶液、6×Loading Buffer、dH2O、Buffer DE-A、Buffer DE-B、异戊醇、Buffer W1、Buffer W2、Eluent、去离子水、三氯甲烷:异戊醇=24:1、Gold View、GelStain（10000X）等。

2.3 器材

真空抽干机、DK-8D数显恒温水浴锅、KQ-250E型医用超声波清洗器、Eppendorf Centrifuge 5810R 离心机、电泳仪、全自动凝胶成像系统、BIO-RAD T100 Thermal Cyclear PCR仪、SW--CJ--IG型单人净化工作台、Nandrop2000核酸蛋白分析仪、LDZX-50KBS 立式高压蒸汽灭菌器等。来!自~751论-文|网www.751com.cn

2.4 样品的准备

将紫薯叶片用研钵磨成粗粉，每个2ml离心管内装入约半管的叶样粗粉以及一颗预先用95%乙醇处理消毒过的钢珠。同时将多功能球磨仪的两个适配器放入装有液氮的泡沫箱中预冷1分钟，填充好的离心管依次配平摆入预冷后的适配器内。适配器固定在对应位置后，检查卡槽是否对齐旋钮是否拧紧。打开电源，调整参数（频率改为25.4，时间改为1分钟）。第一次研磨结束后取一管检查研磨状态，若粉末粗细未达到要求，应适当延长研磨时间。将合格的粉末回收完毕后，把适配器装回原处，并将台面清理干净。在此过程中应注意离心管应配平放入适配器内，以及检查适配器是否卡紧，以防在球磨仪的震荡过程中因受力不均或适配器松动造成的机器故障。

CTAB法提取叶片总DNA：植物中多糖含量较高，为有效去除多糖类杂质，常采用CTAB法抽提植物的基因组DNA[8,9]。苯酚能够使蛋白质变性，从而抑制脱氧核糖核酸么的降解[10]。氯仿又可以去除溶液中的微量酚。所以最后采用酚-氯仿抽提，能使得到的DNA更加纯净[11]。