c 仪器：灭菌的研钵、1.5 mL EP管、镊子、电泳仪。

d 方法：

①：灭菌的研钵中加入2/3药用酒精，让其燃烧，冷却后，液氮预冷。称取0.2 g于-80℃保存的番茄组织置于已经预冷的研钵中，用研杵不断研磨，在研磨过程中不断添加液氮以防止RNA降解。直至样品被研磨成粉状，肉眼无法看见颗粒。（整个操作过程中需戴一次性口罩与手套，防止外界RNA污染样品）；

②：将做好标记的1.5 mL的离心管放在液氮中预冷后，用镊子取出。利用预冷后的药匙将研钵中的样品装入到 1.5 mL的离心管中。再将离心管置于液氮中，直至下一个步骤开始；

③：在试管中加入1.0 mL Trizol，摇匀，15~30℃静置5 min；

④：离心机预冷到4℃，离心管置于离心机中12000 r/min离心10 min。取930 μL上清转移到新的1.5 mL无RNA酶的离心管中（离心管管盖上做好标记）；

⑤：离心管、氯仿分别置于通风厨中，在通风厨中工作。向离心管中添加200 μL氯仿，剧烈振荡15 s。常温静置3 min后，将离心管置于预冷至4℃的离心机中，12000 r/min离心15 min。取上清350 μL置于新的1.5 mL离心管中并标记；

⑥：加入350 μL异丙醇，混匀，常温静置10 min。4℃，12000 r/min，离心15 min，倒掉上清，离心30 s；

⑦：加乙醇1 mL，颠倒几下，12000 r/min离心5 min；

⑧：吸出上清，再离心1 min；吸出余下的上清，晾干。保证乙醇挥发。加20 mL DEPC水，移液枪将其混匀。吸取2 mL置于小的离心管中。置于冰上，电泳备用；

⑨：1×TAE电泳缓冲液配置1.5%的琼脂糖凝胶，加核酸染料，倒胶，待其充分凝结后，取3 μL提取的RNA样品，与溴酚蓝混匀后点样，检测其完整性。另取1 μL样品，紫外分光光度计法测其在260/280 nm处的光吸收值，测定其纯度。将检测合格的样品置于-80℃保存备用。来!自~751论-文|网www.751com.cn

2.2.2番茄总RNA反转录

a 取材：提取出的番茄总RNA。

b 试剂：解链PCR体系(Olig(dT)18（10μM） 2 μL，模板RNA 1 μL，Add ddH2O to 11 μL），反转录PCR体系（5×M-MLV buffer 4 μL，10 mM dNTPs 2 μL，M-MLV(200U/μL) 1 μL，ddH2O 2 μL）。

c 仪器：PCR扩增仪，1.5 mL离心管。

d方法：

①：向离心管中加入11 μL的解链PCR体系（整个实验过程中佩戴一次性手套与口罩）；

②：在PCR扩增仪中70℃环境下解链10 min后取出，置于冰上5 min；

③：向离心管中加入9 μL反转录PCR体系后，在PCR扩增仪中42℃环境中60 min，后继续70℃10 min。-20℃保存待用；

2.2.3 SlERF26基因的引物合成及其基因全长的克隆

a 取材：反转录后的cDNA

b 试剂：PCR扩增体系（H2O 33 μL，KOD Buffer 5μL，dNTP(2mM) 5μL,MgSO4 3μL,cDNA 1μL,KOD酶1 μL，前引物1 μL，后引物1 μL，）。