葡萄籽为葡萄的种子，质量约为单颗葡萄的5%~7%，是葡萄酒厂生产中的废料，经晒干后分离葡萄皮-751|文\论/文'网www.751com.cn、葡萄梗后所得产物。我国是葡萄生产大国，2012年产量达960万吨，可产生至少20-30万吨的葡萄籽。虽然葡萄籽含有丰富的蛋白质、粗脂肪、各种氨基酸、维生素及矿物质等[1]，具有一定的营养及药用价值。但国内现阶段尚未形成对葡萄籽进行良好的加工利用体系，分离后大多丢弃或者通过发酵之后用做农业施肥用料，造成了资源的浪费。

1.2 研究现状

2 材料和方法

2.1 材料

葡萄（Vitis vinifera L.）籽分离自葡萄皮渣，干燥后用于后续试验，由天津尖峰天然产物研究发展有限公司提供。大豆分离蛋白（蛋白含量为85%），购自哈尔滨大豆高新科技有限公司。

2.2 葡萄籽化学成分分析

葡萄籽的各项生化指标检测方法简述如下：水分的测定参见GB/T 5009.3-03：直接干燥法论文网；灰分的测定参见GB/T 5009.4-03：干法灰化；脂肪的测定参见GB/T 5009.6-03：索氏抽提；蛋白质含量的测定参见GB/T 5009.5-03：微量凯氏定氮法。

使用IRIS Intrepid型电感耦合全谱直读等离子发射光谱仪（Thermo，USA），检测葡萄籽金属含量。准确称取葡萄籽粉末0.5 g，放入聚四氟乙烯消解罐中。消解罐中加入10 mL王水（HCl和HNO3的体积比为3∶1），100℃加热2 h，冷却到室温后向消解罐中加入3 mL HNO3，100℃加热2 h，冷却到室温再加入1 mL HNO3，120℃加热4 h，冷却静置过夜。用超纯水定容至50 mL。ICP-AES法测定，射频功率1050 kW，雾化气压力为4.25×106 Pa，辅助气流速110 L/min，样品提升量1170 mL/min，样品冲洗时间1 min，高波扫描5 s，低波扫描30 s。

2.3 葡萄籽蛋白提取及双向电泳分析

将100 g葡萄籽粉碎、匀浆（50 mmol/L PBS +1%（w/v）PVP，pH 7.5，料液比例为1 g∶4 mL），8层纱布过滤后，4℃、12000 g、30 min离心保留上清液，超纯水透析，100 kDa超滤膜浓缩，冷冻干燥，蛋白干粉样品-80 ℃保存备用。