（2）每个样品管加入20mL正己烷，拧紧盖子，摇匀。放入摇床设置参数为温度25℃，转数为150r/min，振荡15min。然后将样品管放置于离心管架上静置10min。

（3）对静置后的样品进行抽滤，抽滤完成后取滤纸上的滤渣于新的50mL离心管中。

（4）用100mL量筒称量20mL超纯水，倒入样品管中，摇匀放在离心管架上。

（5）将样品管连同离心管架放入超声波清洗器（功率220W，频率50KHZ）中，设置超声时间为15min。

（6）每个样品管中用移液器加入卡瑞Ⅰ试剂500µL，卡瑞Ⅱ试剂500µL摇匀振荡(25℃ 150r/min)5min。

（7）样品离心：离心条件为4℃，10000r/min，离心10min。对称的两个样品管的平衡时误差小于0.2g。离心后取中层液过0.22µm滤膜，HPLC检测样品中丙烯酰胺的含量。

（8）HPLC色谱条件 色谱柱：XBridgeTM C18色谱柱，流动相为乙腈：水（10:90，v：v），流速为1.0mL/min；进样量为10µL；柱温为25℃；进样方式：自动进样；检测波长为210nm。

2.2.3 丙烯酰胺标准溶液的配制与标准曲线绘制

（1）精确称量丙烯酰胺标准品0.0500g，用超纯水（哇哈哈纯净水）定容至50mL棕色容量瓶中，配置成浓度为1000µg/mL的丙烯酰胺标准储备液

（2）分别取1000µg/mL的标准使用液1.25、2.5、5、7.5、10、12.5mL，超纯水定容至25mL棕色容量瓶中，配置成浓度为50、100、200、300、400、500µg/mL的标准液，用0.22µm水系过滤膜过滤后，置于样品瓶中。然后按照规定的色谱条件进行HPLC检测，得到相应的丙烯酰胺的出峰时间以及峰面积，做出峰面积对丙烯酰胺浓度的标准曲线，求出回归方程y=0.1872x＋0.3438,R2=0.9937，线性关系良好。HPLC的检出限为0.01µg/mL，有效范围为50-500µg/mL。