1.2 实验方法

1.2.1 四个不同编号的壳寡糖对甘薯黑斑病菌的抑制作用

    以编号327的壳寡糖为例

配制编号327的壳寡糖溶液：

称取编号327的壳寡糖1.5 g于锥形瓶中，加水至100 mL，放入转子并于磁力搅拌器上搅拌均匀。

配制含有编号327的壳寡糖的PDA培养基：

将土豆洗净削皮，称取200g，切成小块后放到电磁炉锅中，向锅中加入1000mL自来水，用玻璃棒持续搅拌，当土豆块可被玻璃棒轻轻戳破时，土豆悬液即煮好。在烧杯中加入葡萄糖20g，将煮好的土豆悬液用4层纱布过滤至烧杯中，用玻璃棒或磁力搅拌器搅拌均匀，并用蒸馏水定容到1000mL，分别量取90、87、84、78mL于4个均加入1.35g琼脂粉的锥形瓶中，再分别加入配制好的编号327的壳寡糖溶液0、3、6、12 mL，加塞，并用报纸和纸绳包扎好锥形瓶，放入灭菌锅中于121℃灭菌30min，取出后在烘箱中烘干，待冷却至室温后在超净工作台上倒平板。

接种及培养：来!自~751论-文|网www.751com.cn

在超净工作台上，用酒精灯外焰对打孔器灭菌，待其冷却后在划线培养的甘薯黑斑病菌菌落上打取菌饼，将接种针用酒精灯外焰灭菌，待其冷却后挑取菌饼倒置于平板中央，每个浓度做3个平行，用封口膜封好并用保鲜袋包扎，置于25℃的恒温培养箱中培养。

菌落直径及产孢量的测定：

自培养之日起，每天测量各平板上甘薯黑斑病菌菌落的直径并记录，10d后观察各平板上菌落的大小、形态等外部特征并拍照记录。在超净工作台上用移液枪移取5mL的无菌水冲洗菌落，将涂布棒干热灭菌后用同等力度均匀地刮取各菌落上的孢子，从而得到孢子悬浮液。用移液枪将孢子悬浮液吸取至白色离心管中，取5μL于电子显微镜下的血球计数板中央，计数并记录孢子数，根据公式换算出每毫升含有不同浓度编号327的壳寡糖溶液的培养基中甘薯黑斑病菌分生孢子的个数。

编号529、420和824的壳寡糖对甘薯黑斑病菌抑制作用的实验步骤同1.2.1