7.5L 发酵罐 Bioflo 110 美国 NBS
真空干燥箱 DZF-6050 南京实验仪器厂
标准型净化工作台 SW-CJ-ID 苏州净化设备厂
隔水式恒温培养箱 GSP-9160MBE 上海博讯实业医疗设备有限公司
高压灭菌锅 MLS-3020 SANYO Electric Lo ,Ltd
冷冻干燥机 FDU-1200 深圳市科力易翔仪器设备有限公司
表2.3 测试仪器一览表
测试仪器名称 仪器型号 生产厂家
傅立叶变换红外分光光度计 IRPrestige-21 3 日本岛津出厂
扫描电子显微镜 JSM-6380LV 日本电子株式会社
透射电子显微镜 JEM-2100 日本电子株式会社
X-射线衍射 D8ADVANCE 德国Bruker公司
2.2 BC的制备
2.2.1 菌种:Acetobacter xylinum NUST4,本实验室筛选。
2.2.2 培养基
(1) 斜面培养基:葡萄糖3%,蛋白胨1%,琼脂1.8%,磷酸氢二钠0.27%,柠檬酸0.115%,硫酸镁0.025%,pH6.0。
(2) 种子培养基:葡萄糖2%,蛋白胨0.5%,酵母粉0.5%,硫酸镁0.025%,磷酸氢二钠0.27%,柠檬酸0.115%,pH6.0。
(3) 发酵培养基:葡萄糖2%,蛋白胨1%,磷酸氢二钠0.27%,硫酸镁0.025%,柠檬酸0.115%,培养基初始pH6.0。
2.2.3 培养条件
(1) 斜面培养:接保藏菌种到斜面培养基,29℃培养48h。
(2) 种子培养:取斜面菌种接入种子培养基,速速121 r/min,29℃振荡培养 48h。
(3) 发酵培养: 将5%接种量(约1ml)种子培养液接入发酵培养基中,转速 121r/min,温度 29℃,培养 7d
2.2.4 样品的分离纯化
(1)将上面所制得的絮状沉淀,即BC粗品,首先用自来水洗涤过滤数次,然后用去离子水洗涤以便除去残留的培养基成分,加去离子水在90℃水浴锅中进行灭菌处理。
(2)用浓度4%的NaOH对其进行浸泡,23℃的水浴中处理3天,去除菌体蛋白,进一步纯化BC产物。
(3)用pH4.5的HAc-NaAc缓冲溶液调节pH值,用去离子水洗涤直至pH值至7.2。将上述BC产物离心后冷冻保藏备用。
2.3 含碳材料的制备
2.3.1水热碳的制备
分别称取一定量的葡萄糖(或蔗糖、果糖、乳糖和木糖)配成60 mL溶液置于不锈钢高压反应釜中,将高压反应釜放入电热恒温干燥箱中,升温至200℃,反应24h。之后,自然冷却至室温得到碳化材料。离心洗涤多次,70℃干燥。
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