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摘要：沃尔巴克氏体是一类存在于节肢动物和线虫体内的革兰氏阴性共生菌，是到目前为止调查过的世界范围内分布范围最广、丰度最大的一类内共生菌。本研究通过对杂拟谷盗沃尔巴克氏体基因wsp和ftsZ的PCR扩增、测序及系统发育分析，试图搞清所用杂拟谷盗种群体内Wolbachia的感染状况和系统进化发生关系。结果分析可知，从所用的杂拟谷盗种群试虫体内扩增出了一个与预期片段大小完全相符的目的基因片段，该序列与基因银行中公布的杂拟谷盗体内沃尔巴克氏体wsp和ftsZ目的基因序列经比对完全一致，这就充分证实所检测的杂拟谷盗种群试虫体内的确感染有沃尔巴克氏体；杂拟谷盗体内沃尔巴克氏体两个特异性基因wsp和ftsZ的核苷酸序列的聚类分析均表明杂拟谷盗和黑拟谷盗体内的内共生菌沃尔巴克氏体的系统发生亲缘关系最近。33498
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毕业论文关键词：杂拟谷盗；沃尔巴克氏体；基因；PCR扩增；系统发生
PCR amplification and sequencing of Wolbachia wsp and ftsZ genes in Tribolium confusum
Abstract: Wolbachia pipientis are a group of intracellular symbiotic bacteria which widely infect arthropods and nematodes and have the most extensive distribution and the highest abundance in nature. To find out the infection situation of Wolbachia in the confused flour beetles Tribolium confusum, we first used PCR amplification and electrophoresis separation of wsp and ftsZ target gene fragments to detecte them in the host using the specific primers, then the two target genes were sequenced and blasted, and finally phylogeny tree of Wolbachia in T. confusum were constructed. The results suggested that Wolbachia existed in T. confusum. Phylogeny revealed that Wolbaciha of T. confusum and T. destructor had the closest relationship.
Key words: Tribolium confusum; Wolbachia; gene; PCR amplification; phylogeny.
目录
摘要 1
Abstract 1
目录 3
引言 1
1材料与方法 2
1.1 供试昆虫 2
1.2 总DNA的提取 2
1.3 PCR 扩增和测序 2
1.4序列提交和对比 3
1.5聚类分析 3
2 结果与分析 3
2.1 杂拟谷盗体内Wolbachia的基因检测和序列比对 3
2.2 聚类分析结果 6
3 讨论 7
致谢 8
参考文献 9
引言
细胞里面的共生菌可以被划分为初生菌和次生菌，初生菌对寄主的生存是必需的共生菌，它能够与寄主一起协同进化，而次生菌则不是寄主生存所必需的共生菌，其对寄主的益与害也不确定。Wolbachia是一类革兰氏阴性细胞内共生菌，属于次生共生菌，从将其正式命名一直到上世纪70 年代之前，在这段期间都很少出现有关Wolbachia的研究报道。直到1971 年，Yen 和Barr[1]发现了在蚊子体内Wolbachia pipientis可以引起杂交不亲和现象，即不含有Wolbachia的雌蚊的卵被含有Wolbachia的雄蚊的精子授精后，受精卵出现了不能存活的现象。一时间，这种奇怪的现象引起了生物界的广泛兴趣。
Wolbachia具有所有立克次氏体的一般特征，它的形态特征分为不规则的杆状和呈现球孢状[2]。Wolbachia被三层膜包被，最内层是由细菌的细胞质膜组成，中间层为细菌的细胞外壁，最外层为寄主组织[3]，这些膜影响Wolbachia生长发育和繁殖[4]。
Wolbachia最初是在雌虫的卵巢中被发现的[5]，所以人们研究的重点都聚焦在各种生殖组织中，而是认为其他组织部位可能不存在。上个世纪末期，随着PCR扩增及测序、以及电镜和蛋白免疫印迹等技术方法的发展，发现沃尔巴克氏体广泛分布于宿主生物体的各种组织内，但是在不同宿主生物的非生殖组织内的存在，具有很大的分布差异[6]。