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摘要: 沃尔巴克氏体(Wolbachia pipientis)又称沃尔巴克氏菌，它广泛存在于节肢动物与线虫体内的细胞内共生菌，是迄今为止发现的在自然界分布最广的一类共生菌。本研究通过对沃尔巴克氏体wsp和ftsZ基因的PCR扩增来确定赤拟谷盗和杂拟谷盗体内的沃尔巴克氏体感染状况，并试图通过饲喂含有四环素的面粉对沃尔巴克氏体进行抑制消除，监测试虫的沃尔巴克氏体的抑制性消除状况，最后恢复普通面粉饲养试虫，观察其恢复状况。多次试验后发现，杂拟谷盗被沃尔巴克氏体感染，赤拟谷盗则没有被感染，在喂食四环素后，沃尔巴克氏体抑制性消失，但是用普通面粉饲养一段时间后沃尔巴克氏体又恢复了感染。本研究不但在理论上具有重要的研究意义，同时也为今后可能利用沃尔巴克氏体对拟谷盗进行预防和控制提供了理论依据。40898
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毕业论文关键词：赤拟谷盗；杂拟谷盗；沃尔巴克氏体；感染状况；去除
Infection status and removal study of Wolbachia in Tribolium castaneum and Tribolium confusum
Abstract: Wolbachia is known as a symbiotic intracellular bacteria in arthropods and nematodes, and also it is the most widely distributed symbiotic bacteria in nature so far. In this study, we used PCR amplification of Wolbachia wsp and ftsZ specific gene to detect the Wolbachia in Tribolium castaneum and Tribolium confusum, then tred to remove the Wolbachia by feeding flour containing tetracycline and monitor removal conditions of tested insects, and finally restored the plain flour feeding and observed their recovery in tested insects. The results showed that Wolbachia existed in T. confusum, but not in T. castaneum. Wolbachia-negative beetles were getted by tetracycline flour treatment, but Wolbachia could resume growth and reproduction after feeding ordinary flour for a period of time. This study has both the important theory significance and the application value, which provides a basis for further research in T. castaneum and T. confusum.
Keywords: Tribolium castaneum; T. confusum; Wolbachia; infection status; removal
目录
引言 1
1 材料与方法 2
1.1供试昆虫 2
1.2 实验试剂 2
1.3 主要试剂的配制 2
1.3.1 DNA提取缓冲液的配制 2
1.3.2 琼脂糖凝胶电泳所用试剂的配制 3
1.4 实验方法 3
1.4.1 PCR扩增检测赤拟谷盗与杂拟谷盗体内的沃尔巴克氏体 3
1.4.2 试虫体内沃尔巴克氏体的抑制性消除试验 3
2 结果与分析 4
2.1 杂拟谷盗和赤拟谷盗体内沃尔巴克氏体的分子检测 4
2.2 杂拟谷盗体内沃尔巴克氏体的抑制性消除与恢复 5
3 讨论 6
致谢： 8
参考文献 8
引言
Wolbachia属于一种革兰氏阴性的细胞内共生菌，是次生共生菌,Wolbachia pipientis属于细菌门、变型菌纲的a亚纲(Alphaproteobaeteria)、立克次氏体目(Rickettsiales)、无形体科(Anaplasmataceae)、Wolbachia属 [1]。沃尔巴克氏体与大多数立克次氏体相同，不能使用人工合成的培养基在体外进行培养，因此使用传统的微生物形态学观察方法来对沃尔巴克氏体进行鉴定比较困难。但是随着分子生物学技术的发展，更多便捷有效的方法均被用来鉴定宿主体内的沃尔巴克氏体，并且研究它的系统发生。目前，使用PCR技术可以有效地分析与检测沃尔巴克氏体的16s rDNA [2]、沃尔巴克氏体表面蛋白基因wsp[3] 以及细胞分裂蛋白基因ftsZ[4] 等基因等，以此对其进行鉴定和系统发生。
沃尔巴克氏体在自然界中分布较为广泛，在鞘翅目、鳞翅目、弹尾目等昆虫体内均有沃尔巴克氏体存在[5]。通过研究相关的学术文献发现，在线虫体内也发现了沃尔巴克氏体的共生，这进一步扩大了沃尔巴克氏体的宿主范围。根据研究统计，受沃尔巴克氏体感染的昆虫种类大约占70%，据对新温带区和新热带区昆虫普查得到的沃尔巴克氏体侵染率推测，沃尔巴克氏体极有可能是自然界中丰富度最大、分布最广的一类共生菌[6]。