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摘要：翻译后修饰调控着真核生物大部分蛋白质的活性，这些修饰的解读对研究生物功能是必不可少的。组蛋白翻译后修饰是蛋白质翻译后修饰中研究的较好一类小分子碱性蛋白，易被各种生物大分子修饰，尤其易发生在N-末端的尾部。不同组合式修饰构成了“组蛋白密码”，在细胞的发育、生长、分化和动态平衡中，组蛋白密码影响着染色体的结构状态，进而调控基因的表达状态。组蛋白翻译后修饰的研究可作为一种模式来解析蛋白质复杂的修饰状态及研究其分子功能。翻译后修饰分析技术的发展对组蛋白密码的解析是至关重要的。本论文以牛血清白蛋白作为标准品，综合运用各种分析技术，并借助dot-blot鉴定修饰情况。关键词：牛血清白蛋白；翻译后修饰；质谱；抗体；斑点杂交9492
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Bovine serum albumin (BSA)
as the standard of exploration of
a protein post-translational modification
Abstracts：Post-translational modification regulates the activity of most eukaryote proteins.Deciphering of these post-translational modifications is indispensable insight into biological function. Histones with kinds of small basic proteins being subjected to various modifications especially at N-terninal tail are the best-studied proteins in post-translational modification research.The combination of these modifications constitutes the“histone code”.Histone codes influence the chromatin structure modulating gene expression in development growth differentiation and homeostasis of cell.The investigation of modified histones can be used as a model to decipher complex combinational modifications and to analyze their molecular functions.The progress of analytical techniques,however,is essential to decipher the histone code.
This dissertation covers the post-translational modification studies of protein such as Bovine serum albumin (BSA) ,comprehensively uses various analytical techniques and identification with the dot-blot.
Keywords:Bovine serum albumin (BSA);post-translational modification;mass spectrometre;anti-body;dot-blot
目 录
1 引言 1
1.1 课题的意义 1
1.2 课题的目的 2
2 蛋白质翻译后修饰的研究3
2.1 牛血清白蛋白简介 3
2.2 蛋白质翻译后修饰研究概况 5
3 实验部分 9
3.1 实验仪器 9
3.2 实验化学试剂 9
3.3 实验材料 10
3.4 实验步骤 10
4 结果和讨论 14
4.1 抗体验证结果 14
4.2 实验中应注意的问题 16
致谢 17
参考文献 18
1 引言
1.1 课题的意义
很长时间里，蛋白质翻译后修饰并未引起足够重视，到2004年泛素介导蛋白质降解的发现获得诺贝尔奖之后，这一情形才有明显改观。迄今，人们已发现多达200多种的蛋白质修饰。蛋白质翻译后修饰是调节蛋白质生物学功能的关键步骤之一是蛋白质动态反应和相互作用的一个重要分子基础，同时，它也是细胞信号网络调控的重要靶点。
蛋白质翻译后修饰几乎参与了细胞所有的正常生命活动过程，并发挥十分重要的调控作用，目前已经成为国际上蛋白质研究的一个极其重要的领域。
生命有机体是一个复杂、动态的系统，时刻进行着不断的新陈代谢，产生新物质、清除废物质及有害物质、协调各个部位间的功能发挥。偶尔该系统也会发生紊乱，引发各种异常功能，出现疾病的症状。而这所有的一切都依赖于生物大分子蛋白质。蛋白质是机体内各种功能的执行者，如机体免疫、细胞凋亡、信号转导、刺激反应及个体发育等。蛋白质功能的正常发挥决定着有机体能否有序、高效的进行。