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    本实验的意义在于至今人们大都在大豆中提取异黄酮[4],但是黑豆比大豆有更高的营养和医药价值,利用微波辐射技术从黑豆豆芽中提取异黄酮,并系统地研究了该工艺的影响因素,以期为黑豆的综合开发提供依据。
    1 实验部分
    1.1 实验所用材料、试剂及仪器
    材料:黑豆。
    试剂:染料木素(上海金穗生物科技有限公司,HPLC≥98%)、蒸馏水、无水乙醇、正己烷、次氯酸钠。
    仪器:722型紫外线分光光度计(上海元析仪器有限公司);微波炉(顺德市格兰仕微波炉电器有限公司);AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司;恒温干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司。  
    1.2 原料的处理[5]
    黑豆豆芽的制备流程:黑豆——筛选——消毒——清洗——浸泡——发芽——清洗——低温干燥。
    挑选成熟饱满未有破损的种子,10%次氯酸钠消毒处理2 min,自来水冲洗,然后用蒸馏水清洗4次,置于烧杯加入适量的蒸馏水,置于恒温箱中30℃浸泡15 h,然后从烧杯中取出沥干,转移到培养皿中,在25℃的恒定培养箱中进行培养发芽102 h。发芽结束后,清洗,在干燥箱中低温烘干。
    1.3 黑豆豆芽异黄酮的提取及含量测定
    1.3.1 异黄酮提取工艺流程
         干燥的黑豆豆芽——粉碎——正己烷脱脂(料液比1:3)2次——低温干燥——粉碎——称重——醇提,微波处理2次——抽滤——合并提取液——定容至一定体积——测吸光度。
    1.3.2 染料木素标准溶液的配制
    准确称取10 mg,用70%溶解并定容至250 mL,摇匀,配制成40 mg/L的标准溶液。
    1.3.3 异黄酮标准曲线的绘制[6]
    分别移取0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90 mL的染料木素标准溶液,置于各个试管中,用70%乙醇定容至10 mL,摇匀,以70%乙醇调零,在260 nm处测定吸光度。以待测试管中染料木素的浓度(μg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,如图1,并作回归处理得回归方程y=0.1166x-0.0015,R2=0.9988。
     
    图1 异黄酮标准曲线
    1.3.4 黑豆豆芽提取液中异黄酮提取率的测定[7]
    准确量取1 mL稀释样品液置于试管中,加入70%乙醇至10 mL,摇匀,并以70%乙醇调零,260 nm处测定吸光度。根据回归方程算出样品液中异黄酮的浓度,按照以下公式计算黑豆豆芽提取物异黄酮的提取率(mg/g)。
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